振动对体外培养IgA肾病人腭扁桃体细胞产生BAFF及低糖期货IgA1的影响

摘要

目的:研究振动对体外培养IgA肾病和慢性扁桃体炎患者腭扁桃体单个核细胞产生BAFF、IgA1及其异常糖基化的影响。
　　方法:收集14例IgA肾病组（IgA nephropathy,IgAN组）患者和12例慢性扁桃体炎组（Chronic tonsillitis，CT组）患者腭扁桃体组织，其中慢性扁桃体炎组包括睡眠呼吸暂停综合征患者，本组均无尿检异常及肾脏病变。分离人腭扁桃体单个核细胞，培养24小时以稳定细胞恢复细胞活性状态，然后分为6组进行实验。A组直接分离培养上清及留取细胞作为基础值，B组不给予振动刺激作为对照组，C组给予1分钟振动刺激，D组给予3分钟振动刺激，E组给予5分钟振动刺激，F组给予10分钟振动刺激，B～F组继续培养72小时后收集培养上清及细胞。用ELISA法检测培养上清中IgA1蛋白的含量及异常糖基化IgA1的水平，Real time-PCR检测细胞B淋巴细胞刺激因子(B-cell-activation factor，BAFF) BAFF、β1，3-半乳糖基转移酶（coreβ1，3-galactosyltrans ferase，C1GALT1）、分子伴侣(coreβ1，3GalT-specific molecular chaperone，Cosmc)的基因表达，分别比较振动对IgAN组和CT组的影响以及不同振动时间的差异。
　　结果:
　　1.未给予振动刺激时，IgAN组患者腭扁桃体单个核细胞IgA1含量、异常糖基化IgA1的水平和BAFF mRNA的表达水平均高于CT组，差异有统计学意义(p＜0.001); IgAN组患者腭扁桃体单个核细胞C1GALT1和Cosmc mRNA的表达水平均低于CT组，差异有统计学意义(p＜0.001)。
　　2.IgAN组患者腭扁桃体单个核细胞经振动刺激后，IgA1含量、异常糖基化IgA1的水平和BAFF mRNA的表达水平均高于未刺激组，差异有统计学意义(p＜0.05)，C1GALT1和CosmcmRNA的表达水平低于未刺激组，差异有统计学意义（p值均＜0.05）。CT组患者腭扁桃体单个核细胞经振动刺激后，BAFF mRNA的表达水平升高(p＜0.05)，但IgA1含量、异常糖基化IgA1的水平及C1GALT1和CosmcmRNA的表达水平无明显差异(p＞0.05)。
　　3.给予振动刺激1分钟后，IgAN组和CT组腭扁桃体单个核细胞BAFF基因的表达均有一定程度的升高，且升高程度无差异，这种升高可引起IgAN组IgA1分泌的增加，而CT组IgA1分泌无变化。随着振动时间的延长，CT组BAFF的表达不再升高，且IgA1含量无变化，而IgAN组BAFF的表达再次明显升高，且升高程度大于CT组，IgA1的分泌也显著增加。但IgAN组腭扁桃体单个核细胞C1GALT1和Cosmc mRNA的表达在不同时间振动刺激各组间无明显差异。
　　4.Pearson相关性分析显示:IgAN组腭扁桃体单个核细胞C1 GALT1和Cosmc mRNA表达量与IgA1异常糖基化水平均呈负相关关系(r=-0.5867，p=0.001;r=-0.5031，p=0.003)，BAFF mRNA的表达量与IgA1含量呈正相关关系(r=0.5037，p=0.012)。
　　结论:给予体外培养的人腭扁桃体单个核细胞振动刺激，可导致IgAN组和CT组BAFF基因的表达升高，振动超过1分钟后IgAN组BAFF升高的程度大于CT组。IgAN组振动可引起IgA1分泌增加，并通过抑制C1GALT1和Cosmc的基因表达来干扰IgA1的糖基化过程，使IgA1异常糖基化水平升高，即IgA1低糖基化。而CT组振动仅引起BAFF基因的表达升高，IgA1分泌无变化。给予体外培养的人腭扁桃体单个核细胞振动刺激，在一定程度上模拟了说话时腭扁桃体在咽喉部共振腔中受到声带产生的振动刺激。本实验表明，振动可对腭扁桃体单个核细胞产生BAFF及低糖基化IgA1造成一定影响，从而参与IgA肾病的发病及进展。

目录

声明

摘要

第一章 前言

第二章 材料与方法

2．1 患者资料

2．1．1 IgA肾病组(IgAN组)

2．1．2 慢性扁桃体炎(CT组)

2．2 试剂及相关仪器

2．2．1 普通试剂

2．2．2 特殊试剂

2．2．3 耗材

2．2．4 相关仪器

2．2．5 主要试剂及配制方法

2．3 实验方法

2．3．1 分离培养腭扁桃体淋巴细胞

2．3．2 台盼蓝染色细胞计数及检测细胞活性

2．3．3 振动刺激腭扁桃体淋巴细胞

2．3．4 MTT实验检测细胞存活率

2．3．5 ELISA法测定培养上清液中IgA1含量

2．3．6 ELISA法测定培养上清液中IgA1异常糖基化含量

2．3．7 Real-time PCR法检测腭扁桃体单个核细胞基因mRNA的表达

2．4 统计学处理

第三章 结果

3．1 IgAN组和CT组患者的基本资料及比较

3．2 振动对体外培养IgAN组和CT组腭扁桃体单个核细胞存活率的影响

3．3 振动对体外培养IgAN组和CT组腭扁桃体单个核细胞上清液中IgA1含量的影响

3．4 振动对体外培养IgAN组和CT组腭扁桃体单个核细胞上清液中IgA1异常糖基化水平的影响

3．5 振动对体外培养IgAN组和CT组腭扁桃体单个核细胞BAFF mRNA表达的影响

3．6 振动对体外培养IgAN组和CT组腭扁桃体单个核细胞C1GALT1 mRNA表达的影响

3．7 振动对体外培养IgAN组和CT组腭扁桃体单个核细胞Cosmc mRNA表达的影响

3．8 体外培养IgAN组人腭扁桃体单个核细胞IgA1产生及其糖基化相关因子的Pearson相关性分析

第四章 讨论

4．1 腭扁桃体与IgA肾病的关系

4．2 腭扁桃体在咽喉部共振腔中可能受声带振动的影响

4．3 振动对体外培养IgAN组和CT组患者腭扁桃体单个核细胞BAFF及IgA1产生的影响

4．4 振动对IgA肾病患者腭扁桃体单个核细胞IgA1异常糖基化的产生及C1GALT1、Cosmc基因表达的影响

第五章 结论

参考文献

综述 IgA肾病异常糖基化IgA1导致肾损害的致病机制

攻读硕士学位期间研究成果

致谢