呼吸道感染患者外周血中肺炎嗜衣原体的检测与分析

摘要

目的：
　　应用PCR法和ELISA法分别检测呼吸道感染患者PBMC和RBC中的Cpn DNA及血清中Cpn-IgG，以了解本地区Cpn的感染率；并结合呼吸道感染患者病史及其他临床资料，分析在呼吸道疾病中Cpn感染的重要性，为监测该病原体的流行及进一步研究其预防措施提供一定的参考。
　　方法：
　　收集173名呼吸道感染患者和52名健康体检者外周血标本，分离PBMC、血清和红细胞。用基因组DNA提取试剂盒提取纯化PBMC和RBC中的DNA，以该DNA为模板，用特异性引物体外PCR扩增Cpn16S rRNA和MOMP基因。扩增产物按照标准方法在1.5％琼脂糖凝胶中电泳鉴定，并对产物 DNA进行测序，并与Genebank中登录的Cpn AR-39序列进行BLAST比较，以进一步确认扩增产物为Cpn特异性基因。用ELISA诊断试剂盒（Savyon Diagnostics）检测待测血清中的Cpn-IgG抗体。通过PCR与ELISA的检测结果，结合临床资料进行综合分析。
　　结果：
　　以PBMC DNA提取物为模板，呼吸道感染组中Cpn MOMP阳性率为32.40%（56/173），16S rRNA阳性率为33.52%（58/173）；在对照组52人中，5人MOMP和16S rRNA扩增阳性，阳性率为9.62%；经测序比对：MOMP扩增产物与Cpn AR-39的MOMP基因99%一致；16S rRNA扩增产物与AR-39的16S rRNA基因97%一致。在所有的RBC DNA样本中均未检出Cpn基因。ELISA检测血清Cpn-IgG，感染组阳性率50.87%（88/173），对照组阳性率为30.77%（16/52）。血清Cpn-IgG抗体检测及16S rRNA和MOMP PCR扩增结果均显示呼吸道感染组Cpn感染阳性指标均显著高于健康对照组。ELISA、16S rRNA PCR及MOMP PCR三种方法检测Cpn感染指标在各年龄组的阳性率分别为：18～40岁年龄组40.00%（14/35）、22.86%（8/35）和17.14%（6/35）；41～60岁年龄组27.78%（10/36）、13.89%（5/36）和13.89%（5/36）；61～79岁年龄组60.24%（50/83）、48.19%（40/83）和48.19%（40/83）；80岁以上年龄组73.68%（14/19）、26.32%（5/19）和26.32%（5/19）。根据各组的阳性率可以看出，老年人的Cpn感染率最高。3例PCR阳性的呼吸道感染患者Cpn-IgG检测为阴性；同样35例Cpn-IgG阳性的患者，35例16S rRNA PCR阴性，33例MOMP阴性；而两种Cpn特异性基因的PCR检测结果高度一致。在临床常见的呼吸道疾病中，以COPD患者的Cpn感染指标检处率最高，提示Cpn感染可能是COPD发生发展的一个重要原因。
　　结论：
　　1）PCR法和ELISA法均在呼吸道感染患者不同年龄阶段检出较高的Cpn感染指标，说明Cpn是本地区呼吸道感染常见的病原体之一。
　　2）老年人是Cpn感染的高发人群，Cpn感染与COPD的发生关系最密切。
　　3）PBMC中可检出Cpn核酸，而RBC中未检出，说明临床成分输血可以最大限度地减少Cpn通过血液传染的危险。
　　4）Cpn感染引起的临床症状无特异性，并常与其他细菌混合感染。

目录

封面

声明

目录

主要缩略语英文索引

中文摘要

英文摘要

1 前 言

2 实 验 材 料

2. 1 主要仪器设备及材料

2. 2 主要实验试剂

3 试验方法及步骤

3.1 外周血液标本的分离和模板提取

3.2 PCR引物的设计、体外扩增及鉴定

3.3 ELISA法检测血清中Cpn-IgG

3.4 统计学处理

4 实 验 结 果

4.1 PBMC中提取的DNA为模板的PCR

4.2 RBC中提取的DNA为模板的PCR

4.3 ELISA法检测血清中Cpn-IgG

4.4 ELISA法与PCR法的检测结果比较

4.5 两种基因的PCR检测结果比较

4.6 呼吸道感染组中MOMP基因扩增阳性患者的临床资料分析

5 讨 论

6 结 论

参考文献

[文献综述]

参考文献

发表及待发表论文

致谢