不同种属动物对大豆凝集素敏感性的比较研究

摘要

本试验以六种动物(鸡、鹅、狗、兔、猪、山羊，各4个重复)为研究对象，通过细胞凝集和吸附测定两种方法，研究了纯化大豆凝集素(SBA)对不同种动物的影响。凝集反应试验采用吸光法测定了SBA与动物未经修饰的红细胞、胰蛋白酶修饰的红细胞和脾脏淋巴细胞的凝集活性；吸附试验采用ELLSA法测定了SBA与小肠粘膜和完整小肠组织的结合能力。 试验中所用的纯化SBA用交联瓜尔多糖凝胶法进行分离提纯而获得，在细胞凝集试验中，以2倍稀释法设定SBA的浓度梯度，在可发生凝集作用的有效时间后，测定上清液620nm处的吸光值；在吸附测定试验中，所用ELLSA法是直接以SBA为抗体，用辣根过氧化物酶进行标记，标记抗体与小肠样品反应后，通过测定酶活性(OD495nm)来间接反应肠黏膜与SBA的结合能力，试验设九个SBA浓度梯度。 SBA与未经修饰红细胞的凝集反应表明：兔对SBA极为敏感，猪次之，山羊只在特定浓度区间发生凝聚反应，鸡、鹅和狗未发生凝集反应。对兔来说，SBA稀释度从2倍到64倍这个区间，其OD值几乎为零，发生强凝集反应；稀释到1024倍，SBA浓度为1.5×10-3mg/ml时，红细胞悬浮液的OD值与空白对照管基本相同，无凝集现象发生，此时可能达到了临界浓度。对猪来说，SBA稀释度在16倍前，发生强凝集反应；稀释到128倍，SBA浓度为1.25×10-2时，无凝集反应发生。羊的情况较特殊，只在SBA被稀释8倍到64倍之间时发生弱凝集反应，其它浓度时无凝集现象。 SBA与胰酶修饰红细胞的凝集反应表明：红细胞经修饰后，某些动物对SBA更为敏感。修饰后，兔红细胞在SBA稀释到4096倍才无凝集反应，临界浓度可能为3.93×10-4mg/ml，敏感程度提高了4倍；猪的红细胞在SBA稀释到1024倍时，无凝集反应，临界浓度为1.5×10-3mg/ml，敏感程度提高了6-8倍；鸡的红细胞经胰酶修饰前，无凝集作用发生，而修饰后，在SBA稀释到2倍至4倍时发生弱凝集反应；山羊的红细胞经胰酶修饰以后，反而无凝集作用发生，但不能断言其无SBA结合位点，可能是因为山羊的红细胞不适合被胰酶修；鹅、狗红细胞依然无凝集反应。 SBA与脾淋巴细胞的凝集反应表明：六种动物的淋巴细胞均不同程度地与SBA发生了凝集反应。兔最敏感，最高稀释度为64倍，临界浓度为0.025mg/ml；鹅、狗、鸡最高稀释度为16倍，临界浓度为0.1mg/ml；猪的最高稀释度为8倍，临界浓度为0.2mg/ml；羊的最高稀释度为4倍，临界浓度为0.4mg/ml。 ELLSA法吸附测定结果表明：以10倍稀释时，不同种属动物间的离散性最高，粘膜样本F值为50.02，小肠组织样本F值为74.88，说明SBA的浓度越高种间差异越明显。对肠粘膜来说，SBA稀释10倍时，结合程度排序为鸡、兔、狗、鹅、猪、山羊。鸡和兔与其它动物差异显著(P＜0.05)，二者之间差异不显著(P＞0.05)；狗与其它动物差异显著(P＜0.05)；鹅、猪、山羊与其它动物差异显著(P＜0.05)，三者之间差异不显著(P＞0.05)。到30000倍时，除鸡、羊外，其它四种动物结合率几乎为零，且鸡的结合能力明显高于山羊(P＜0.05)。完整小肠组织与肠粘膜吸附测定结果高度相关，总体相关系数为0.95，说明可以用完整小肠组织代替肠粘膜进行ELLSA法检测。 综上所述，不同种属动物对SBA的敏感性不同，用不同方法测定的同一种动物对SBA的敏感性也不同。

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文摘

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引言

材料与方法

结果与分析

讨论

问题与不足

试验创新点

结论

研究设想

参考文献

附录

致谢

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