miR-185对胃癌细胞SGC-7901侵袭迁移及CDC42基因表达的影响

摘要

目的：探讨miR-185对胃癌细胞SGC-7901侵袭迁移所起的作用，进一步阐述miR-185对CDC42基因的影响。
　　方法：1.采用前期miRNA微阵列芯片结果，选取目的miRNA，qRT-PCR技术进一步验证芯片结果。2.采用瞬时转染方法，将miR-185 mimics和无义序列分别转染至SGC-7901细胞，倒置荧光显微镜观察细胞转染情况，qRT- PCR检测细胞转染效率。胃癌细胞转染后侵袭和迁移能力的变化则通过Trans-well小室法和划痕实验观察。生物信息学软件预测目的miRNA的靶基因，qRT-PCR检测转染后各组中CDC42基因的mRNA转录水平，Western blot检测其蛋白表达水平。
　　结果：1.qRT-PCR验证备选miRNA的基因芯片结果。2.选取miR-185作为研究对象，利用生物信息学筛选出 CDC42为其靶基因。胃癌细胞SGC-7901转染24小时后，倒置荧光显微镜观察结果显示细胞的转染效率约为80％。转染miR-185 mimics后，qRT-PCR检测结果显示SGC-7901细胞中 miR-185表达水平显著升高。Trans-well小室法和划痕试验检测结果显示，转染miR-185 mimics后细胞侵袭和迁移能力均下降。qRT-PCR、Western blot检测结果显示，miR-185 mimics组较转染阴性组、转染试剂组及空白对照组CDC42基因的mRNA及蛋白表达水平均降低。
　　结论：1、miR-185过表达可抑制胃癌细胞SGC-7901侵袭和迁移能力。2、miR-185过表达能够下调CDC42基因mRNA及蛋白质的表达，miR-185可能通过CDC42基因在胃癌发生发展中发挥重要作用。3、miR-185在胃癌中可能扮演着抑癌基因作用。

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第一章 前言

第二章 实验材料

2.1 主要试剂

2.2主要仪器

第三章 实验方法

3.1 细胞培养

3.2 筛选目的miRNA及预测其靶基因

3.3 qRT-PCR验证芯片结果

3.4 载体构建和细胞转染

3.5 细胞侵袭和迁移能力检测

3.6 实时定量PCR检测miR-185和CDC42 mRNA水平

3.7 蛋白印迹实验检测蛋白水平

3.8 实验数据分析

第四章 实验结果

4.1 筛选目的miRNA及预测其靶基因

4.2 qRT-PCR检测不同细胞中miR-185的差异表达

4.3 倒置荧光显微镜和qRT-PCR检测miR-185转染情况

4.4 miR-185对胃癌细胞SGC-7901侵袭转移的影响

4.5 qRT-PCR检测miR-185对SGC-7901细胞中CDC42 mRNA的影响

4.6 miR-185对SGC-7901细胞中CDC42蛋白表达的影响

第五章 讨 论

第六章 结 论

参考文献

综述：miR-185与肿瘤关系的研究进展

攻读学位期间的科研成果

致谢