MAP4K1表达水平改变对膀胱尿路上皮癌T24细胞增殖、侵袭及迁移的影响

摘要

目的:观察MAP4K1表达水平改变对膀胱尿路上皮癌T24细胞增殖、侵袭及迁移的影响,为膀胱癌的诊治提供新的思路. 材料与方法:以膀胱尿路上皮癌T24细胞(简称T24细胞)为研究对象,实验分组为:空白对照组(T24细胞组),阴性对照组(T24细胞+MAP4K1-NC组),抑制组(T24细胞+MAP4K1-homo-524),过表达组(T24+MAP4K1过表达载体).各组细胞接种24h后,利用LipofectamineTM2000分别向阴性对照组、抑制组及过表达组T24细胞内转染体外合成的MAP4K1-NC片段、MAP4K1-homo-524片段、MAP4K1过表达载体.(1)转染6h后于荧光显微镜下观察各组转染率,细胞的转染效率达到80%以上可进行后续的实验.(2)转染后于24h、48h、72h,MTT实验检测各组细胞OD值.(3)转染24h后行Transwell实验,检测各组细胞跨膜个数.(4)转染24h后进行细胞划痕,并继续培养24h、48h、72h,划痕实验检测各组细胞划痕愈合率. 结果:1)荧光显微镜下观察T24细胞中阴性对照组、抑制组、过表达组的转染情况,显示细胞转染效率达到80%以上,可进行后续实验.(2)MAP4K1表达水平改变对T24细胞增殖能力的影响:MTT实验结果显示MAP4K1过表达组转染24小时、48小时及72小时后,OD值分别为0.601±0.021、0.822±0.029、1.012±0.039;其增殖率分别为7.5%±0.4%、11.8%±0.7%、14.1%±0.9%.MAP4K1抑制组转染24小时、48小时及72小时后,OD值分别为0.484±0.026、0.625±0.028、0.694±0.042;其抑制率24h、48h、72h分别为:10.5%±0.6%、14.3%±0.8%、16.8%±1.0%.两组结果分别与空白对照组、阴性对照组对比,差异性显著(P值均小于0.05,).空白对照组与阴性对照组比较无显著性差异(P值大于0.05).(3)MAP4K1表达水平改变对T24细胞侵袭能力的影响:Transwell侵袭实验结果显示,细胞转染24小时后,MAP4K1过表达组穿膜细胞数为45±2.5个,MAP4K1抑制组穿膜细胞数为28±2.0个,分别与空白对照组35±1.8、阴性对照组38±1.6对比,差异性显著(P值均小于0.05).空白对照组与阴性对照组相比无显著性差异(P值大于0.05).(4)MAP4K1表达水平改变对T24细胞迁移能力的影响:划痕24小时后,MAP4K1过表达组、MAP4K1抑制组划痕愈合率分别为14.73%±0.84%、5.16%±0.75%,分别与空白对照组8.39%±0.55%、阴性对照组7.90%±0.89%相比,差异性显著(P值均小于0.05);划痕48小时后,MAP4K1过表达组、MAP4K1抑制组划痕愈合率分别为27.43%±0.8%、9.94%±0.85%,分别与空白对照组13.82%±0.85%、阴性对照组13.28%±0.86%相比,差异性显著(P值均小于0.05);划痕72小时后,MAP4K1过表达组、MAP4K1抑制组划痕愈合率分别为29.69%±0.78%、11.35%±0.43%,分别与空白对照组17.24%±0.80%、阴性对照组16.34%±0.90%相比,差异性显著(P值均小于0.05). 结论:MAP4K1能增强T24细胞增殖、迁移及侵袭能力,提示MAP4K1与膀胱尿路上皮癌的发生、发展有密切关系.

目录

声明

主要缩略英文索引

第1章绪论

2.1主要材料及仪器设备

2.1.1细胞株

2.1.2 主要试剂与耗材

2.1.3 主要仪器设备

2.2实验方法

2.2.1细胞复苏

2.2.2细胞传代

2.2.3细胞冻存

2.2.4细胞接种

2.2.5细胞转染

2.2.6 细胞划痕实验

2.2.7 MTT实验检测细胞增殖

2.2.8 Transwell实验检测细胞侵袭

2.3 数据处理与分析

第3章实验结果

3.1 测定转染效率

3.2 MAP4K1水平改变对T24细胞增殖能力的影响

3.3 MAP4K1水平改变对T24细胞侵袭能力的影响

3.4 MAP4K1水平改变对T24细胞迁移能力的影响

第4章 讨论

第五章 结 论

参考文献

文献综述:microRNA-96在泌尿系三大肿瘤中的表达及对临床诊疗作用的研究进展

攻读硕士期间发表的论文

致谢