C-端序列分析方法学研究与HWAP-I生物活性方面的研究

摘要

蛋白质序列分析是蛋白质研究中的核心技术.N端测序已经成为十分完善的技术,并已经实现了自动化.C端与N端一样,在蛋白质分子结构分析中具有重要地位,不仅对N端封闭的蛋白质进行序列测定,而且对基因克隆具有指导意义.尽管Schlack-Kumpf降解法的研究进展缓慢,但是近十年研究表明该方法是很有希望成为C端顺序测定的常规方法.在蛋白质C端(异)硫氰酸法顺序测定技术中,标准氨基酸乙内酰硫脲(TH-AA)的制备是必须首先要解决的问题.该文以L-型氨基酸为原料,采用乙酸酐做活化试剂,TBS-ITC为偶联试剂,制备了20种TH-AA,反应产物通过RP-HPLC进行了分离纯化.该文同时在偶联试剂方面进行了探索,采用合成的13肽(NH2-KKESDFLMFVYLV-COOH)为模型肽,并偶联到DITC玻璃珠上进行了方法学研究.通过实验条件的优化对C-端序列分析的化学方法进行了微量化探索,在0.5nmol规模可获得三个氨基酸C-端序列信号.改变偶联试剂的浓度发现在0.2mol/L可获得最佳的偶联效果.同时应用两种偶联试剂TBS-ITC和TPGe-ITC进行了C-端序列测定的比较,在1nmol规模上对模型肽前4个残基进行了序列分析.其中用TBS-ITC进行序列测定的初始回收率为60.8﹪,重复回收率为76.7﹪,用TPGe-ITC进行序列测定的初始回收率为68.8﹪,重复回收率为81.4﹪.结果证明TPGe-ITC比TBS-ITC是一种更好的偶联试剂.

目录

缩写表（中英文对照）

第一部分C-端序列分析的方法学研究

第一章前言

第二章制备标准氨基酸乙内酰硫脲

第三章模型肽的合成

第四章偶联试剂序列分析的比较

第五章设想与展望

第二部分虎纹镇痛肽的有关性质研究

第一章HWAP-I活性单位测定

第二章HWAP-I的稳定性实验

参考文献

致谢

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