聚合草多糖提取、纯化及理化性质研究

摘要

聚合草（Symphytum officinale L.）是紫草科多年生草本植物;是一种优质高产;利用期长的饲料作物。聚合草也是一种药用植物;具有抗炎、止痛等药效。多糖是广泛分布于生物中的聚合物;近几十年来;多糖因其具有抗氧化、抗病毒、抗糖尿病、抗肿瘤、抗炎、免疫调节等功能而受到研究者的广泛关注。为了深入了解聚合草的活性成分;本研究以聚合草为原料;分离纯化多糖;研究其理化性质和活性;为聚合草资源的开发利用提供理论依据。试验结果如下： （1）采用了热水提取（HW）、超声波辅助提取（UA）、酶法提取（EA）和酶-超声波辅助提取（EUA）四种方法提取聚合草多糖（Comfrey polysaccharides; CPs）;分别得到HW-CPs; UA-CPs; EA-CPs和EUA-CPs四种多糖。结果表明：EA-CPs的总糖和蛋白质含量都显著高于其他三种多糖（P<0.05）;UA-CPs提取率（14.36%）最高;分子量较小;HW-CPs的糖醛酸含量较高;ABTS自由基清除活性和还原力较强。 （2）由于HW-CPs的ABTS自由基清除活性和还原力较强;且HW成本低;操作简单;因此对HW的提取条件进行响应面优化。HW最佳工艺条件为：液料比25﹕1（mL/g）;提取时间150 min;提取温度84℃;按此条件提取CPs得率为129.87 mg/g。 （3）利用热风干燥（HD）、真空干燥（VD）和冷冻干燥（FD）三种方式干燥CPs。结果表明：冷冻干燥多糖（FD-CPs）的多糖得率及总糖、蛋白质、硫酸基和糖醛酸含量均显著高于热风干燥多糖（HD-CPs）和真空干燥多糖（VD-CPs）（P＜0.05）;FD-CPs 的分子量最小;FD-CPs 的 DPPH自由基清除活性、ABTS 自由基清除活性和还原力均显著高于HD-CPs和VD-CPs（P＜0.05）。因此FD是干燥CPs较合适的方法。 （4）利用DEAE-52纤维素离子交换柱层析和Sepharose CL-6B凝胶柱层析分离纯化CPs;获得纯化的均一多糖;命名为 CPs-1.2。通过紫外光谱检测 CPs-1.2;没有核酸和蛋白吸收峰;CPs-1.2红外光谱具有典型的多糖吸收峰。采用Sepharose CL-6B凝胶柱层析法测定CPs-1.2的分子量;为3812.39 Da。采用HPLC测定单糖组成;结果显示：CPs-1.2由半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖组成;其摩尔比为 1.00﹕2.28﹕1.13﹕0.88。抗血糖活性试验表明;CPs-1.2对α-葡萄糖苷酶具有较强的抑制活性。

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