黑柄炭角菌菌丝体水溶性多糖的分离纯化与结构鉴定

摘要

黑柄炭角菌[Xylaria nigripes (KI．)Sace．]属于子囊菌亚门(Ascomycotina)、炭角菌目Xylariales、炭角菌科Xylariaceae、炭角菌属Xylaria，又名乌灵参，鸡枞蛋，是一种名贵稀有的药用真菌，具有补气、固肾、健脾除湿、镇静安神等功效。新近研究发现该菌能够提高机体免疫功能和调节内分泌代谢平衡，其粗多糖能提高巨噬细胞吞噬功能。其发酵菌丝体在化学成分、药理和临床方面和天然黑柄炭角菌基本一致，且无任何毒副作用。本文拟对黑柄炭角菌发酵菌丝体的水溶性多糖进行分离纯化，确定其结构特征，以期为其药理作用和临床应用等方面提供理论基础。研究结果如下： 黑柄炭角菌菌丝体经热水煮提、乙醇沉淀得到粗多糖，经乙醇分级、蛋白酶法和Sevag法联合脱蛋白、凝胶柱层析方法纯化得到两种水溶性多糖XNW-1和XNW-2。XNW-1和XNW-2均为白色粉末，都较难溶于冷水，易溶于热水，均易被醇、酮等有机溶剂析出。经紫外扫描检测和Sephadex G-100分析表明XNW-1和XNW-2为均一组分；XNW-1和XNW-2遇碘液不变色，说明均为非淀粉性多糖，即不含多个连续无分支的α—(1→4)键型；单糖组成分析表明两者均只含葡萄糖。XNW-1和XNW-2的糖含量分别为96％和94％。经SephoroseCL-6B柱色谱测得)(XNw-1的相对分子质量为9.0×105。并对纯度高的XNw-1进行了进一步的结构分析。 XNW-1经IR、甲基化分析、1H NMR、13C NMR分析表明：XNW-1由α型糖苷键构成；主要连接方式为(1→4)葡萄糖(82％)，构成主链的核心；其它连接方式包括(1→4，6)葡萄糖(12％)，(1→6)葡萄糖(1％)，末端(1→)连接葡萄糖(5％)：末端糖基所占比重不大，说明XNW-1为低分支结构。 溴化四唑蓝法初步测定了XNW-1体外抗肿瘤活性。体外活性研究实验表明：XNW-1在体外抗肿瘤实验中对MCF-7细胞无直接的杀伤作用(P>0.05)。

目录

文摘

英文文摘

声明

第一章引言

1.1糖类的研究历史

1.2真菌多糖的生物活性

1.3多糖生物活性的构效关系

1.4多糖的分离纯化和相对分子质量测定

1.5多糖的结构研究

1.6选题依据

第二章材料与方法

2.1实验材料

2.2供试试剂与仪器

2.3实验方法

第三章结果与分析

3.1粗多糖得率和含量分析

3.2多糖的纯化

3.3多糖的物理性质

3.4紫外扫描分析

3.5柱色谱分析

3.6红外光谱分析

3.7多糖XNW-1相对分子质量分析

3.8结构分析

3.9 XNW-1体外抗瘤活性试验

3.10结论

3.11本章图示

第四章讨论

4.1多糖的分离纯化

4.2多糖的结构鉴定

4.3多糖的抗肿瘤活性

4.4后续性实验展望

参考文献

附录在读期间发表的学术论文

致谢