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解除休眠后人参种子常温储存技术及人参早期选育的研究

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摘要

人参以种子为唯一繁殖方式,种子是其种植中的重要材料,但因其具有休眠特性,需要解除休眠才能发芽。由于解除休眠处理时间较长,增加了种子与病原微生物接触的几率,即使储存前对种子进行消毒处理,或药效时间有限,或形成耐药菌株,加之含水量较高,导致种子在运输过程中提前发芽、霉变,影响种子播种后的成苗率,并一定程度上加重了人参幼苗期的病害。同时,人参品质优劣与遗传基因密切相关,直接影响后代的生产性能和质量,育种初期因其幼苗质量小、皂苷含量低无法完成质量检测,加之4年才能结种子、世代间隔长等特性,导致传统的人参育种周期长。如何在保持解除休眠后人参种子活性的前提下延长其常温储存时间,减轻解除休眠后人参种子在运输过程中发芽、霉变情况,加快人参品种选育的进程,对人参产业具有重要的意义。本研究以解除休眠后人参种子的发芽指标和霉变情况为标准,筛选适合解除休眠后人参种子常温储存的最适含水量和包装类型;分离并鉴定储存过程中导致种子霉变的、耐药的病原微生物,并用滤纸片法筛选其敏感的药剂,为提高人参种子发芽率和预防种传病害提供理论基础;通过分子鉴定技术,筛选高皂苷人参株系特异性PCR扩增引物,并优化其反应体系,研制出高皂苷人参株系早期检测试剂盒,为加快人参品种选育提供科学依据。得出以下结论: 1. 综合种子的发芽指标和霉变情况分析,种子含水量为 35%、封口包装为解除休眠后人参种子常温储存最佳条件。该条件下储存21d有效发芽率为66.16%,发芽势57.61%,发芽指数4.20。 2. 分离、鉴定出4种导致解除休眠后人参种子霉变的病原菌,分别是毛霉菌、镰刀菌、白地霉和假单胞菌。通过筛选发现金碘+菌多杀对此4株病原菌的抑制效果最好,其次为真菌细菌毙,再次为福福锌、百菌清,多菌灵和甲基硫菌灵则无明显抑制作用(P<0.05)。 3. 成功研制出高皂苷人参株系早期检测试剂盒,该试剂盒特异性引物为GC1,其PCR最佳扩增条件为:退火温度为48.7℃,DNA浓度为2.60 mg/L,Mg2+浓度为1.44 mmol/L, dNTP 浓度为0.19 mmol/L,引物浓度为0.32μmol/L,Taq酶浓度为0.076 U/μL。 4. 对高皂苷相关基因进行测序和Blast对比,确定该基因为甘油-3-磷酸脱氢酶基因。该酶是催化糖酵解中间产物转化为甘油-3-磷酸(Gly3p)的关键酶,为人参皂苷合成的丙酮酸途径(MEP)提供前体物质,从而促进人参皂苷合成、积累。

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