ErbB4在胆管癌中的表达变化及作用研究

摘要

目的:检测表皮生长因子受体-4(ErbB4)在人肝内胆管癌(ICC)组织、癌旁组织和结石性肝内胆管组织中的表达情况，分析ErbB4的表达与肝内胆管癌临床病理的关系。并进一步观察表皮生长因子络氨酸激酶抑制剂对胆管癌细胞株QBC939增殖及凋亡的影响。初步探讨ErbB4在胆管癌发生发展及转移中的作用与机制，为ICC临床诊治及预后判断提供思路。
　　方法:1.收集湖南省人民医院肝胆外科2010年4月至2014年11月期间部分进行手术切除的肝内胆管标本，实验分三个组:肿瘤组为30例肝内胆管癌组织标本;癌旁组是对应的距离肿块1cm外的胆管组织标本;结石组为10例结石性肝内胆管组织标本。采用免疫组化方法（SP法）检测三组中ErbB4的表达，并分析三组之间ErbB4表达的差异性及其与临床病理指标间的关系。
　　2.体外培育人胆管癌细胞株QBC939，免疫细胞化学方法检测QBC939细胞中ErbB4的表达。表皮生长因子络氨酸激酶抑制剂AG1478在不同时间(24h，48h，72h)，不同浓度(0，0.1，1，10，100μg/ml)条件下干预QBC939细胞，噻唑蓝比色法(MTT)法检测细胞生长增殖抑制情况，流式细胞术测定细胞凋亡及细胞周期结果。
　　结果:1.ErbB4强阳性表达率在肿瘤组中为83.3％，癌旁组为36.7％，结石组为20.0％，三组间表达差异有统计学意义(p＜0.05)。而且其差异性主要表现在细胞核上的表达，肿瘤组显著高于癌旁组及结石组，差异有统计学意义(p＜0.05);而在细胞膜及细胞质中，三组间表达差异无统计学意义(p＞0.05)。
　　2.在肝内胆管癌组织中ErbB4异常高表达与肿瘤临床TNM分期及淋巴结转移相关（均p＜0.05）。
　　3.免疫细胞化学显示ErbB4在胆管癌细胞株QBC939中呈阳性表达，主要表达于细胞质中。
　　4.抑制剂AG1478能抑制QBC939细胞增殖，而且抑制剂浓度越高、作用时间越长其抑制效果越显著，其中IC50(24h)为55.98μg/ml，IC50(48h)为32.48μg/ml, IC50(72h)为20.85μg/ml。
　　5.流式细胞术检测结果显示抑制剂AG1478(20μg/ml)处理不同时间后，QBC939细胞均表现为不同程度的S期阻滞，对照组S期占11.264％，24h组占14.764％，48h组占19.934％，72h组占39.392％，而且72h组细胞完全阻滞在S期。QBC939细胞的凋亡率也逐渐增加，对照组凋亡率为4.503％，24h组为9.145％，48h组为14.219％，72h组为17.499％，显著高于对照组。
　　结论:1.ErbB4在肝内胆管癌组织中呈异常高表达，表达部位可以是细胞膜，细胞质和细胞核，其中细胞核表达存在特异性。
　　2.ErbB4异常高表达与肝内胆管癌发生淋巴结转移及TNM分期相关。
　　3.经络氨酸激酶抑制剂AG1478处理后，胆管癌细胞株表现出增殖抑制，凋亡增加，细胞周期阻滞在S期。

目录

摘要

前言

第一部分 ErbB4在肝内胆管癌中的表达及临床意义

材料与方法

结果

讨论

第二部分 ErbB4对胆管癌细胞株QBC939增殖和凋亡的影响

材料与方法

结果

讨论

全文结论

参考文献

附录

主要研究成果

综述 ErbB4在恶性肿瘤中的研究进展

致谢

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