c-AMP/PKA信号通路在γ-氨基丁酸抑制胆管癌细胞株QBC939生长中的作用研究

摘要

目的 探讨c-AMP/PKA信号通路在γ-氨基丁酸(GABA)抑制胆管癌细胞株QBC939生长中发挥的作用.方法 分别以GABA、GABA+ 8Br(cAMP激动剂)、GABA +H89(PKA 拮抗剂)孵育胆管癌细胞株QBC939 48 h,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法及Annexin Ⅴ-FITC/PI流式细胞术检测细胞的增殖及凋亡,ELISA法检测cAMP、蛋白激酶A(PKA)表达情况,Westem blot法检测PKA Ⅰ/PKA Ⅱ蛋白表达.结果 MTT及流式细胞术检测结果显示8Br协同GABA所导致的增值抑制(20.30％±0.57％ vs 16.11％ ±0.73％,t=8.977,P＜0.05)和凋亡效应(32.62％±2.45％vs 28.38％±1.53％,t=2.929,P＜0.05),而H89拮抗此效应; ELISA检测结果显示GABA明显上调eAMP及PKA的含量,8Br协同GABA增加cAMP含量(26.08 ±0.15 vs 25.88±0.06,t=8.565,P＜0.05),H89拮抗CABA所导致PKA的含量(933.13±3.13 vs 947.71 ±6.51 t=2.512,P＜0.05);Western blot检测结果显示,GABA较对照组能明显下调PKA Ⅰ(0.0878 ±0.003 vs 0.1521±0.003,t=29.687,P＜0.05),上调PKA Ⅱ蛋白的表达(0.2042 ±0.012 vs 0.1461 ±0.072,t=8.152,P＜0.05).结论 GABA可能通过cAMP/PKAⅡ信号通路发挥抑制胆管癌细胞株QBC939生长的作用.