还原型谷胱甘肽及多烯磷脂酰胆碱对成人原代肝细胞培养的保护作用

摘要

目的:
　　研究还原型谷胱甘肽及多烯磷脂胆碱对分离后成人原代肝细胞培养的保护作用。
　　方法:
　　选择成人良性病变的手术切除肝组织标本，采用改良胶原酶灌注法分离提纯肝细胞，倒置显微镜下观察，血球计数法计数，用台盼蓝拒染法初步检测细胞活性。实验分为两部分，第一部分:根据还原型谷胱甘肽及多烯磷脂胆碱浓度不同，分为GSH0.1mmol/L、1mmol/L、2mmol/L、5 mmol/L、10mmol/L组和PPC1μ mol/L、5μ mol/L、10μ mol/L组，MTT法分析细胞活性情况。第二部分:根据MTT结果，选取最优浓度的GSH和PPC药物分组，设置空白对照，收集培养的1、3、5、7天的上清液，检测其中白蛋白、谷丙转氨酶、谷草转氨酶的含量变化。
　　结果:
　　1.改良胶原酶灌注法分离肝细胞总数可达109个以上;
　　2.台盼蓝拒染法测定新鲜分离的人原代肝细胞活率在90％以上;
　　3.不同浓度还原型谷胱甘肽及多烯磷脂胆碱对原代肝细胞的活性均具有保护作用，其中GSH5mM组和PPC5μM组效果最为明显;
　　4.检测1-7天的空白组上清液中白蛋白含量没有明显差异(P＞0.05)，GSH组和PPC组上清液中白蛋白含量明显增长，P＜0.05，第7天上清液中白蛋白含量大于空白对照组(P＜0.05);5.在1、3、5天时空白组ALT以及AST在细胞外液中含量明显大于药物组，结果有意义(P＜0.05)，前5天细胞外液中的ALT及AST漏出逐渐减少，在第5天时达到最低值，之后含量回升。在第7天含量结果无差异(P＞0.05)。
　　结论:
　　1.1L培养基中加入还原型谷胱甘肽5mM及多烯磷脂酰胆碱5μM对于离体培养的成人原代肝细胞活性具有良好保护作用;
　　2.还原型谷胱甘肽和多烯磷脂酰胆碱可维持分离培养的成人原代肝细胞较好的白蛋白分泌功能;
　　3.还原型谷胱甘肽和多烯磷脂酰胆碱有助于维持成人原代肝细胞的细胞膜完整性。

目录

摘要

1．引言

2．材料与方法

2．1 实验材料

2．1．1 实验对象

2．1．2 主要试剂

2．1．3 主要试剂调配

2．1．4 主要仪器

2．2 实验方法

2．2．1 肝细胞分离

2．2．2 肝细胞纯化

2．2．3 肝细胞计数及活率测定

2．2．4 肝细胞培养

2．2．5 MTT法

2．2．6 白蛋白检测

2．2．7 谷丙转氨酶检测

2．2．8 谷草转氨酶检测

2．3 统计学方法

3．实验结果

3．1 灌注分离的肝脏标本外观

3．2 新鲜分离的人原代肝细胞形态学观察

3．3 培养7天的肝细胞形态学观察

3．4 MTT实验结果

3．5 白蛋白测定实验结果

3．6 转氨酶测定实验结果

4．讨论

5．结论

参考文献

综述

攻读硕士期间的主要成果

致谢

声明