体外人原代肝细胞分离与培养及冻存研究

摘要

目的 通过对人原代肝细胞分离、培养、冻存,研究冻存前后肝细胞的形态功能,以期为生物人工肝、肝细胞移植的研究及应用提供细胞来源.方法 采用多点穿刺两步灌流法分离原代肝细胞,体外预培养24 h,经程序降温盒冷冻法短期冻存.复苏后对细胞的活力、形态、微生物污染及相关功能基因表达进行测定.结果 复苏后,肝细胞存活率达到(71.6±2.2)％,相较新鲜分离的肝细胞,存活率达到90％以上,体外培养时间长达12天,无微生物污染,复苏前后白蛋白(ALB)、谷氨酰胺合成酶(GS)、氨甲酰磷酸合酶1(CPS1)以及细胞色素酶P450 3A4(CYP3A4)功能基因表达无统计学差异(P＞0.05).结论 初步建立了人原代肝细胞分离、培养、冻存方法,为生物人工肝及相关肝细胞治疗奠定了研究基础.