肝内胆管癌中Sirt3、HIF-1α的表达与MnSOD活力及相关性研究

摘要

目的:以免疫组织化学方法检测肝内胆管癌组织与癌旁组织间Sirt3表达差异，并分析其临床意义;以免疫印迹半定量方式检测Sirt3及HIF-1α在肝内胆管癌与癌旁组织的表达差异;WST-1方法检测两者间MnSOD酶活力差异，并进行三者间相关性研究与分析。
　　方法:
　　收集2015年1月至2016年10月间在湖南省人民医院肝胆外科接受肝内胆管癌手术治疗的33例术后病理诊断证实为肝内胆管(ICC)患者病例资料及其切除标本。以2010年发布的第七版美国肿瘤联合会(AJCC) TNM分期系统进行肿瘤分期。其中患者肿瘤组织作为实验组，癌旁组织作为对照组。第一步，采取免疫组织化学方法检测Sirt3在ICC组织与癌旁组织内的表达;第二步，采取Western-blotting方法检测Sirt3与HIF-1α在ICC组织和癌旁组织的相对表达量;第三步采取WST-1法检测ICC组织与癌旁组织内MnSOD酶活力。分析ICC组织内Sirt3阳性表达的临床意义，Sirt3与HIF-1α相对表达量及MnSOD酶活力间的相关性。
　　结果:
　　1免疫组化结果
　　1.1 ICC组织中Sirt3阳性表达率45.5％(15/33)低于癌旁组织中Sirt3阳性表达率100％(33/33)，有统计学意义(P＜0.05)。
　　1.2 Sirt3表达临床意义:ICC组织中，Sirt3表达与肿瘤分化程度、淋巴结转移及TNM分期相关，有统计学意义（P＜0.05）;与病人性别、年龄、肿瘤直径不相关，无统计学意义（P＞0.05）。
　　2 Western-blotting结果
　　ICC组织Sirt3相对表达量(0.349±0.194)低于癌旁组织中Sirt3相对表达量(0.816±0.287)，有统计学意义（P＜0.05）;ICC组织中HIF-1α相对表达量(0.655±0.105)高于癌旁组织HIF-1α相对表达量(0.241±0.227)，有统计学意义（P＜0.05）。
　　3 MnSOD酶活力检测结果
　　ICC组织MnSOD酶活力(0.589±0.094U/mg)低于癌旁组织MnSOD酶活力(1.086±0.508U/mg)，有统计学意义(P＜0.05)。
　　4相关性研究结果
　　Sirt3表达与HIF-1α表达呈负相关，Sirt3表达与MnSOD酶活力呈正相关，HIF-1α表达量与MnSOD酶活力呈负相关。
　　结论:
　　1.ICC组织中Sirt3低表达，与ICC的淋巴结转移、分化程度、临床分期相关;HIF-1α表达升高，MnSOD活力降低;Sirt3表达与HIF-1α表达呈负相关，与MnSOD活力呈正相关，HIF-1α表达与MnSOD活力呈负相关。
　　2.ICC组织中，Sirt3低表达与肿瘤发生、发展相关，可能机制为HIF-1α依赖的促瘤因子表达升高，组织内ROS相关氧化应激损伤增加。

目录

摘要

第一章 前言

第二章 材料与方法

2．1 材料来源及选择

2．2 主要实验试剂

2．3 主要实验器材

2．4．1 免疫组织化学方法

2．4．2 Western-blotting方法

2．4．3 MnSOD活性检测

2．5 结果判断标准

2．6 统计学分析

3 免疫组织化学结果

4 Western-blotting结果

5 WST-1结果

6 相关性研究结果

第四章 讨论

第五章 结论

不足与展望

参考文献

附录

综述 Sirt3及其与肿瘤关系

致谢

声明