人群血清中酞酸酯的气相色谱测定方法研究

摘要

目的：酞酸酯（PAEs，又被称为邻苯二甲酸酯）是工业上广泛使用的增塑剂和软化剂，对其进行生物监测意义重大。PAEs可通过饮水、进食、皮肤接触（化妆品、驱蚊油等）和呼吸进入人体，吸收后主要以蛋白结合体形式通过血液分布于全身各器官。酞酸酯主要有生殖毒性、致哮喘作用，与糖尿病和肥胖也有关系。我国在这方面的研究尚属起步阶段，本课题欲研制血清中DBP、DEHP的检测方法，为我国DBP、DEHP的检测方法提供依据，为下一步血清中DBP、DEHP生物接触限值的制定提供技术支持。
　　方法：采用液液萃取法对血清中DBP、DEHP进行分离、纯化，以减小血清杂质对分析测定的干扰，提高检测方法灵敏度，同时用气相色谱、FID检测器对分离出的DBP、DEHP进行定性定量分析。通过对液液萃取参数和色谱参数指标的最优试验选择，研制符合相关要求的血清中DBP、DEHP的液液萃取—气相色谱检测方法，并对所建立的方法的线性范围、检出限、精密度、准确度、样品存放稳定性以及实用性等性能指标进行测试。并采用研制的方法对塑料EP管和玻璃离心管保存血清的效果有无差异进行探究，以证实可否用塑料EP管代替玻璃离心管。
　　结果：1.0mL血清加1mL正己烷，漩涡震荡充分混匀，3000r/min的转速离心40min，取上层正己烷层，重复操作3次合并上清液，90℃水浴20min蒸至近干，正己烷定容至1.0mL，样品预处理效果最佳;三阶程序升温:初温100℃(保持2min)，50℃/min升温至260℃，3℃/min升温至270℃，10℃/min升温至300℃(保持5min)，DBP、DEHP出峰最快、峰形最好。本研制方法在0.10～10.0 mg/L的检测范围内，有较好线性，DBP、DEHP线性回归方程分别为Y=1467.9X+581.18、Y=1478.2X+541.49，相关系数分别为r=0.9996、r=0.9993。由标准差法测得的检出限为0.10mg/L和0.08mg/L。准确度用加标回收试验测试，低、中、高三个浓度的平均加标回收率范围分别为96.76％～104.99％和94.78％～99.91％。日内与日间精密度的相对标准偏差(RSD)范围分别为DBP:3.05％～4.81％和3.23％～6.50％，DEHP:2.40％～3.63％和2.93％～8.67％。该方法的稳定性实验表明，样品在4℃、-20℃的冰箱内至少能保存两周。用塑料EP管和玻璃离心管在不同温度下保存血清一段时间的检测结果表明二者之间的无统计学意义（P＞0.05）。现场试验对126份某医院体检病人的血清进行检测，DBP、DEHP检出率为5.6％和15.1％，浓度范围依次为ND～3.58 mg/L和ND～13.52 mg/L，均数依次为0.105 mg/L和0.386 mg/L。
　　结论：本研究研制了人群血清中酞酸酯的气相色谱测定方法，用于测定血清中DBP、DEHP。通过对某医院的126份血清进行测定，结果表明该方法可行、实用，可以应用到人群中本底调查，更可以应用到职业人群监测中。液液萃取—气相色谱测定方法具有设备简单、易于操作、准确度高等优点，满足生物材料测定方法各指标的要求。若要进一步提高方法的精密度，可采用气质联用装置，方法的检出限会更好。在短期内在4℃、-20℃的条件下可以用塑料EP管替代玻璃离心管保存血清。

目录

声明

摘要

前言

1 材料和方法

1．1 原理

1．2 仪器

1．3 试剂与材料

1．4 实验条件

1．5 溶液的配制

1．6 样品的采集

1．7 样品分析

1．8 数据统计

2 结果

2．1 液液萃取条件的选择和色谱条件的选择

2．2 标准曲线

2．3 工作曲线

2．4 最低检出浓度

2．5 准确度试验

2．6 精密度试验

2．7 样品稳定性试验

2．8 实际应用结果

2．9 塑料EP管和玻璃离心管保存效果对比实验

3 讨论

3．1 色谱条件和液-液萃取条件的选择

3．2 方法学指标

3．3 塑料EP管和玻璃离心管保存效果对比结果

4 小结

参考文献

综述 人体生物材料中酞酸酯类检测方法的研究进展

附录一 硕士在读期间学术成果

致谢