交沙霉素生产菌株JOS-20的诱变育种及培养基配方优化

摘要

本文通过对交沙霉素产生菌纳儿榜链霉菌交沙霉素变种(S.narbonensisvar.josamyceticus)的JOS-20菌株进行复壮，获得了一株发酵效价相对较高的菌株＃20。以＃20菌株为出发菌株，依次用紫外线—氯化锂复合诱变、链霉素抗性诱变，60Co-γ射线诱变、原生质体再生诱变、原生质体—紫外线复合诱变、原生质体电转诱变和亚硝酸盐诱变等7种诱变手段对＃20进行育种工作。结果发现上述的多种诱变手段都能一定程度的获得正突变株，达到提高交沙霉素产生菌产素能力的目的。其中，原生质体—抗性质粒电转化诱变是本次试验中效果最好的诱变育种手段。经过一系列诱变育种筛选，最终筛得三株高产菌株：yx-36、yx-94、yx-245，经过五代稳定性实验发现，yx-245虽然初始效价没有另外两株高，但是产素较另外两株稳定，因而被确定为最优菌株，并确定以该菌株为供试菌株，进行后续发酵工艺的研究工作。 以yx-245菌株为试验菌株进行了发酵培养基的优化研究，探索了原始配方中各单因子对该菌株合成交沙霉素的影响。并经L18(37)正交筛选试验，最终筛选到一个发酵培养基的最佳配方，经过对比试验，该配方比原始配方提高菌株产素达17.76％.

目录

摘要

一.前言

1.大环内酯类抗生素发展概述

2.交沙霉素的基本性质概述

3.交沙霉素的临床应用

4.交沙霉素的作用机理

5.交沙霉素的生物合成和化学改造

6.交沙霉素的生产与销售情况

7.本实验的目的和意义

二.材料与方法

1.实验材料

1.1供试菌株

1.2培养基

1.3试剂

1.4实验仪器

2.实验方法

2.1培养条件

2.2交沙霉素定量分析方法

2.3交沙霉素产生菌形态和培养特征的观察

2.4诱变与筛选方法

2.5高产菌株的选育

2.6发酵培养基的筛选

三.结果与分析

3.1交沙霉素定量分析方法研究结果

3.1.1硫酸显色法测定

3.1.2生物效价的测定(管碟法)

3.2交沙霉素产生菌形态和培养特征的观察结果

3.2.1交沙霉素产生菌培养特征的观察结果

3.2.2交沙霉素产生菌分生孢子和孢子丝扫描电镜观察结果

3.3原始菌株的复壮

3.4交沙霉素产生菌#20的诱变育种

3.4.1紫外线—氯化锂复合诱变结果

3.4.2链霉素抗性育种诱变结果

3.4.3 CO60-r射线对链抗-41诱变结果

3.4.4原生质体再生诱变结果

3.4.5原生质体—紫外线复合诱变结果

3.4.6原生质体—抗性质粒电转化诱变结果

3.4.7亚硝酸盐诱变

3.4.8稳定性试验

3.4.9诱变系谱图

3.5发酵培养基的优选结果

3.5.1不同碳源对交沙霉素合成的影响

3.5.2不同氮源对交沙霉素合成的影响

3.5.3单因子试验结果

3.5.4 L18(37)正交试验结果

3.5.5最优培养基配方的验证

四.讨论

参考文献

致谢