结核分枝杆菌MazEF毒素-抗毒素蛋白相互作用研究

摘要

结核分枝杆菌含有丰富的MazEF毒素-抗毒素系统，已有的研究已经证实它们在病原菌免疫逃避和持续性感染过程中发挥重要作用，但这些不同MazEF系统之间是否能够协同调控结核分枝杆菌在恶劣的宿主细胞环境中存活等还不清楚。研究这些MazEF蛋白之间的相互作用网络，以及它们与重要靶蛋白之间的功能偶联关系对于阐明这些机制具有重要意义。
　　本论文系统研究了结核分枝杆菌7对MazEF蛋白之间的相互作用关系，以及这种相互作用对拓扑异构酶Rv3646c(TopA)活性和毒素蛋白（MazF）的ssRNA切割功能的调控影响，具体结果如下：（1）通过细菌双杂交实验，构建了结核分枝杆菌7对MazEF蛋白之间以及它们与TopA之间的相互作用网络，进一步采用Pull-Down和Western blot方法验证了Rv1495与TopA及其它MazEF之间的物理相互作用。（2）分别鉴定了MazE，MazF以及它们的复合体蛋白对TopA松弛超螺旋质粒功能的影响，发现了MazE和MazF能够通过形成复合体相互抑制它们的这种调控功能。（3）鉴定了MazF以及它们的复合体蛋白的ssRNA内切酶活性，发现了MazE和MazF也能够通过形成复合体抑制 MazF的这种功能。（4）采用随机突变结合细菌双杂交技术鉴定了Rv1495与Rv0660c和TopA相互作用的必要的氨基酸位点,这些Rv1495突变蛋白也丧失了对拓扑异构酶功能的抑制活性。
　　本研究首次构建了结核分枝杆菌7对MazEF蛋白之间的互作网络，发现了不同MazEF蛋白之间的交叉调控关系，这些结果为进一步阐明结核分枝杆菌不同 MazEF系统之间的协同作用机制奠定了基础，同时也为揭示该病原菌独特的持续感染和致病机制提供了重要线索。

目录

声明

缩略语

第一章 前言

1毒素-抗毒素系统介绍

2 致病菌中的毒素-抗毒素系统

3 结核分枝杆菌中的MazEF毒素-抗毒素系统及研究现状

第二章 材料与方法

1 材料

2 方法

第三章 结果与分析

1 细菌双杂交筛库相关蛋白的相互作用

2 MazEF对于TopA松弛螺旋作用研究

3 MazF的核酸内切酶试验

4 利用随机突变技术找到Rv1495与Rv0660c互作的关键位点

5利用随机突变技术找到Rv1495与TopA互作的关键位点

6 Pull down/Western blot实验

第四章 总结与讨论

1 总结

2讨论

3 研究展望

参考文献

致谢