Al-8810对水牛卵母细胞体外成熟和早期胚胎发育作用的研究

摘要

奶牛75-80％的繁殖损失是早期胚胎死亡引起的，40％以上的胚胎损失发生在妊娠早期的8-17天。研究表明，早期妊娠与体内前列腺素F2α(PGF2α)的分泌密切相关。本研究从体内和体外研究PGF2α受体抑制剂(AL-8810)对水牛受胎率、黄体形态和功能、卵母细胞和早期胚胎发育的影响，探讨其调控水牛卵母细胞和早期胚胎发育的作用及机制，对养牛生产实践中降低早期胚胎损失和提高繁殖率具有理论和实践意义。主要研究结果如下所示:
　　 1.PTGFR mRNA在不同发育阶段水牛IVF胚胎中的表达水平
　　 研究发现PTGFR mRNA在各个发育阶段的水牛IVF胚胎中均有表达。在4-16细胞期PTGFR mRNA表达量显著高于未受精的裸卵，桑椹胚细胞的PTGFRmRNA表达量显著低于裸卵时期和极显著低于4-16细胞期。
　　 2.PTGFR在水牛卵母细胞和IVF胚胎中的表达定位
　　 本研究通过免疫荧光染色，发现在水牛卵母细胞及IVF胚胎中存在PTGFR的染色体表达定位。
　　 3.AL-8810对水牛卵母细胞体外成熟与凋亡的作用
　　 不同浓度(100nM、200nM、400nM、800nM、1600nM)的AL-8810对水牛卵母细胞体外核成熟均无显著影响。高浓度处理组(1600nM)的早期凋亡率显著高于对照组(63.57％ vs.27.02％);各浓度处理组的中晚期凋亡率均低于对照组，其中高浓度处理组(1600nM)中晚期凋亡率仅为7.35％，显著低于其余各组。但是卵母细胞发育能力检测试验的结果却与此相反，高浓度处理组(800nM、1600nM)的桑椹胚率明显低于低浓度处理组(100nM)，差异显著。
　　 4.AL-8810对水牛IVF胚胎的作用
　　 在不同时间(0-48h、48-96h、96-144h)，分别用100nM、200nM、400nM、800nM、1600nM的AL-8810处理，胚胎发育至16-细胞期的数量有显著增加。其中，0-48h和48-96h各浓度处理组效果显著优于96-144h组(70.09％，73.43％vs.56.76％)和对照组，最优的处理组合为0-48h-800nM(88.67％)和48-96h-400nM(85.00％)。在16-细胞期(96h)之前用AL-8810处理，桑椹胚率比之后有增高的趋势，但差异不显著，其中48-96h-800nM(50.00％)处理组合所得到的桑椹胚率明显高于其它各组。PGF2α受体抑制剂处理96h之前的胚胎相比，之后的有较高的囊胚率(3.61％，2.78％ vs.1.39％)。AL-8810处理可以抑制水牛IVF胚胎PTGFR的mRNA表达水平，并具有浓度依赖性，高浓度处理组(400nM、800nM、1600nM)和对照组(0 nM)之间差异显著。
　　 5.AL-8810对水牛黄体形态与功能的作用
　　 在人工输精后，以人工输精的方式，将已用PBS稀释的AL-8810(5000nM)送入子宫开口处。AL-8810处理对水牛黄体直径大小无显著影响，对血中主要激素LH、E2、P4水平也无显著影响。
　　 6.AL-8810对水牛受胎率的影响
　　 人工输精后宫腔内灌注0.25mL5000nM AL-8810对水牛受胎率无显著影响。
　　 综述所述，水牛卵母细胞与胚胎均表达PTGFR mRNA，PGF2α受体抑制剂AL-8810可降低PTGFRmRNA表达量，提高水牛IVF胚胎16细胞期胚胎率，但AL-8810在体内对黄体及胚胎发育的影响还需要继续深入研究。

目录

论文说明

声明

摘要

缩略词表

1 前言

2 PGF2α及其受体的生物学研究进展

2．1 前列腺素系统的生物学特性

2．2 PGF2α的人工合成

2．3 PGF2α受体(PTGFR)种类和作用机制

3 PGF2α和PTGFR在繁殖上的作用

3．1 PGF2α与排卵

3．2 PGF2α与输卵管

3．3 PGF2α与黄体

3．4 PGF2α与胚胎发育

3．5 PGF2α与着床

3．6 PGF2α与分娩

3．7 PGF2α与母性行为

4 PGF2α抑制剂

5 研究目的、意义和技术路线

第一章 水牛卵母细胞和IVF胚胎的PTGFR表达

1 引言

2 材料与方法

2．1 试验材料

2．2 主要试验方法

3 试验结果

3．1 不同发育阶段水牛IVF胚胎的PTGFR mRNA表达水平

3．2 PTGFR在水牛卵母细胞和IVF胚胎中的表达定位

4 讨论

4．1 PTGFR与卵母细胞的关系

4．2 PTGFR与早期胚胎的关系

第二章 AL-8810对水牛卵母细胞和早期胚胎发育的作用

1 引言

2 材料与方法

2．1 试验材料

2．2 主要试验方法

3 试验结果

3．1 AL-8810对水牛卵母细胞体外成熟与凋亡的作用

3．2 AL-8810对水牛IVF胚胎的作用

4 讨论

4．1 PGF2α与卵母细胞成熟的关系

4．2 PGF2α与早期胚胎发育的关系

第三章 AL-8810对水牛黄体功能和受胎率的影响

1 引言

2 材料与方法

2．1 试验材料

2．2 主要试验方法

3 试验结果

3．1 AL-8810对水牛黄体形态与功能的影响

3．2 AL-8810对水牛受胎率的影响

4 讨论

4．1 PGF2α与黄体功能的关系

4．2 PGF2α与受胎率的关系

第四章 小结

参考文献

致谢