副猪嗜血杆菌冻干保护剂的筛选与优化

摘要

副猪嗜血杆菌（Haemophilus parasuis，HPS）是定植在猪上呼吸道的一种常在的条件致病菌，可在特定条件下侵入动物机体引发格拉瑟病，是以纤维素性渗出为主要特征的胸膜炎、腹膜炎、心包炎、脑膜炎和关节炎。目前商品化的副猪嗜血杆菌疫苗以灭活疫苗为主，但是由于副猪嗜血杆菌对外界环境的抵抗力不强，冻干过程中很容易死亡，因此冻干过程中必须添加冻干保护剂以提高冻干存活率。鉴于以上背景，为了提高副猪嗜血杆菌冻干存活率，本文对冻干保护剂进行研究，筛选并优化了副猪嗜血杆菌的冻干保护剂配方。
　　本研究主要内容包括：⑴比较了4种现有细菌类保护剂配方和9种本实验室所用保护剂配方的保护效果，并筛选出冻存存活率比较高的两种配方，配方11.12％脱脂奶+4.87%海藻糖+2.96%甘油，其应用于副猪嗜血杆菌的冻存存活率为33.8%；配方10%蔗糖+2%明胶+5%甘油，其冻存存活率为36.9%。⑵将冻存实验中的筛选出的配方进行冻干实验，最高冻干存活率配方为11.12%脱脂奶+4.87%海藻糖+2.96%甘油，其冻干存活率为36.4%。⑶把配方11.12%脱脂奶+4.87%海藻糖+2.96%甘油通过正交试验来优化配方中各种冻干保护剂成份的比例，配方A1B1C1（9.12%脱脂奶+2.87%海藻糖+2.96%甘油）冻干存活率为62.0%。⑷考察单种保护剂成份添加到基础保护剂配方中之后的保护效果，单因素分析了保护剂甘露醇、D-山梨醇、盐类保护剂（MnSO4和 L-精氨酸盐酸盐）、氨基酸类保护剂（甘氨酸、组氨酸和精氨酸）、蔗糖、BSA、Vc等。⑸选择单因素分析实验中保护效果较好的一种或者两种保护剂添加到基础保护剂配方中做5因素3水平的正交实验，再次改变配方中各成份比例来优化配方，但冻干存活率仍为62.0%。⑹把实验中得到的存活率最高（62.0%）的配方A1B1C1（9.12%脱脂奶+2.87%海藻糖+2.96%甘油）做3批次冻干实验，经过验证，此配方3批次的平均冻干存活率为60.3%。

目录

声明

缩略语表（Abbreviation）

1文献综述

1.1副猪嗜血杆菌

1.2冻干保护剂

1.3真空冷冻干燥

2. 研究目的和意义

3. 实验材料和方法

3.1实验材料

3.2 实验方法

4结果与分析

4.1冻存实验结果

4.2 冻干实验结果

4.3 改良优化实验

4.4 冻干验证试验

5 讨论

5.1副猪嗜血杆菌冻干保护剂配方的研究

5.2阴性菌冻干过程中易死亡与其细胞壁结构有关

5.3保护剂溶液的浓度与冻干样品的形态有关

5.4 正交实验适用于冻干保护剂研究

5.5 脱脂乳对于细菌的冻干效果显著

5.6 甘油在菌体冷冻阶段发挥着很重要的作用

5.7 海藻糖在冷冻阶段和干燥阶段对菌体均有很好的保护作用

5.8 配方中物质有适宜的配比才能达到最好的冻干效果

5.9 配方的保护效率不会随着保护剂种类增加而提高

6 结论

参考文献

致谢