鲤疱疹病毒Ⅱ型灭活疫苗免疫应答机理与保护效果研究

摘要

异育银鲫(Carassius gibelio)是我国重要的经济鱼类，在淡水养殖中占有非常重要的地位。近年来，我国鲫鱼养殖业中暴发一种病毒性疾病——鲫造血器官坏死症，其病原为鲤疱疹病毒Ⅱ型（Cyprinid herpesvirus2，CyHV-2），给鲫鱼养殖业造成重大经济损失，严重影响了鲫鱼养殖业的发展。疫苗免疫被认为是预防水产养殖动物传染性疾病最为有效的方法。本研究对CyHV-2细胞培养灭活疫苗的制备方法、有效免疫剂量、鲫鱼免疫后的外周血免疫指标、血清生化指标变化规律与保护效果进行了研究，初步建立一种预防鲫造血器官坏死症的免疫方法。本论文的主要内容如下:
　　1.采用β-丙内酯（β-propiolactone，BPL）灭活细胞培养的鲤疱疹病毒Ⅱ型（CyHV-2）制备灭活疫苗，分别以不同剂量的疫苗通过腹腔注射免疫健康异育银鲫。在免疫后7、14、21、28d，从对照组和各免疫组中随机挑选三尾鲫鱼尾静脉采血，取血清进行中和抗体滴度测定。免疫30d后攻毒试验，每尾鲫鱼经腹腔注射500ul的1.0×107TCID50ml-1的CyHV-2活病毒，持续观察14d，记录鱼体死亡情况，评价不同剂量疫苗的免疫保护效果。结果显示，免疫剂量为1.0×107TCID50ml-1的试验组，在人工感染试验后，其相对免疫保护力可达71.4％。
　　2.鲤疱疹病毒Ⅱ型灭活疫苗注射免疫健康鲫鱼，分别于免疫后不同时间点采集鱼体外周血和组织样，计数外周血红细胞和白细胞数以及白细胞分类计数，测定吞噬细胞活性、血清的抗体效价和血清酶活性，检测免疫相关基因表达量的变化。研究表明，免疫鲫鱼外周血中红细胞和白细胞数目在免疫后一周内显著增加，并于第4天和第7天达峰值，且极显著高于对照组(P＜0.01)。白细胞分类计数中嗜中性粒细胞和单核细胞百分比分别在第4天和第7天到达最高值;随后，淋巴细胞百分比在免疫后第14天开始显著高于对照组(0.01＜P＜0.05)，第21天达峰值。免疫后一周内细胞吞噬活性显著升高，且吞噬百分比和吞噬指数均在第4天达到最高值，分别为(33.56±2.96)％和7.12±0.68。免疫鲫鱼血清中溶菌酶和超氧化物歧化酶活力在免疫后第4、7和14天显著增强，且均于第7天达到峰值。血清抗体效价在免疫前一周变化不显著，第14天开始显著升高，21天达峰值。免疫相关基因C3补体和IL-11的表达量在免疫后两周内均出现了显著的上调。

目录

声明

摘要

缩略语表(按字母顺序排列)

第一章 文献综述

1 鲤疱疹病毒Ⅱ型研究进展

1．1 国内外流行现状

1．2 鲫造血器官坏死症流行病学研究

1．3 鲤疱疹病毒Ⅱ型的理化和生物学特征

1．4 鲤疱疹病毒Ⅱ型的检测技术

2 鱼类免疫系统研究

2．1 鱼类非特异性免疫

2．2 鱼类特异性免疫

3 渔用疫苗的研究

3．1 疫苗的分类

3．2 疫苗的免疫途径

3．3 影响疫苗免疫效果的因素

4 研究目的及意义

第二章 鲤疱疹病毒Ⅱ型(CyHV-2)细胞培养灭活疫苗有效免疫剂量研究

1 材料与方法

1．1 实验材料

1．2 实验方法

1．3 数据分析

2 结果与分析

2．1 疫苗的无菌检验与安全性检验

2．2 中和抗体检测

2．3 相对免疫保护率

3 讨论

第三章 CyHV-2灭活疫苗注射免疫异育银鲫效果研究

1 材料与方法

1．1 实验材料

1．2 实验方法

1．3 数据分析

2 结果与分析

2．1 血细胞计数

2．2 白细胞分类计数

2．3 吞噬细胞吞噬活性

2．4 血清酶活性

2．5 中和抗体效价

2．6 免疫相关基因的表达变化

2．7 相对免疫保护率

3 讨论

结论

参考文献

攻读硕士学位期间发表的学术论文

攻读硕士学位期间参加的会议与培训

致谢