重组人促红细胞生成素对氧化损伤的血管内皮细胞的保护作用

摘要

目的：研究重组人促红细胞生成素对氧化损伤的血管内皮细胞的保护作用及其作用的机制。
　　 方法：体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC)建立过氧化氢诱导的内皮细胞氧化应激损伤模型，按不同浓度的重组人促红细胞生成素(rhEPO)(1.25U/ml,2.50U/ml,5.00U/ml,10.00U/ml,20.00U/ml)分组，分别于过氧化氢(H2O2)损伤前预处理。①用噻唑蓝(MTT)比色检测细胞活力；②流式细胞仪AnnexinV-FITC/PI染色检测细胞凋亡。③免疫细胞化学法观察rhEPO对H2O2 损伤的内皮细胞细胞色素C表达的影响④黄嘌呤氧化法和硫代巴比妥法分别测定细胞上清的超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)含量。
　　 结果：0.1mmol/L H2O2对人脐静脉内皮细胞有损伤作用。①MTT法测细胞活力：H2O2 损伤组与正常对照组比较，细胞A 值明显下降(P<0.01)，rhEPO 干预组与损伤组比较细胞A 值升高(P<0.05)。②流式细胞仪检测细胞凋亡：H2O2 损伤组细胞的凋亡率为(44.3±2.13)[％]较正常对(0.6±0.39)[％]明显增高(P<0.01)，而给予rhEPO(5.00U/ml、10.00U/ml)预处理组凋亡率分别为(22.6±1.23)[％]，(11.7±1.01)[％](P<0.01)，较损伤组明显降低。③细胞色素C在细胞内的表达：正常对照组未见明显的棕黄色颗粒，H2O2 损伤组的细胞胞浆内可见到明显浓染的棕黄色颗粒，rhEPO 预处理组中棕黄色颗粒较损伤组减少，且随rhEPO 浓度升高而减少。④细胞上清MDA 值和SOD 活力的测定：H2O2 损伤组MDA 较正常对照组明显增高(P<0.01)，SOD的活力明显减低(P<0.01)，而给予rhEPO 预处理各组较损伤组MDA 值降低(P<0.01)，SOD 活力增高(P<0.01)。
　　 结论：重组人促红细胞生成素对氧化损伤的血管内皮细胞具有保护作用，且呈剂量相关性，随着rhEPO 浓度增高，其保护作用越明显，其作用机制可能与抗氧化应激反应有关。