重组人促红细胞生成素抑制细胞自噬减轻心肌微血管内皮细胞氧化损伤

摘要

目的 探讨重组人促红细胞生成素(recombinant human erythropoietin,rhEPO)对大鼠心肌微血管内皮细胞(cardica microvascular endothelial cells,CMECs)氧化损伤的保护作用和可能机制.方法 组织块贴壁法培养CMECs,倒置显微镜形态学观察,免疫荧光法鉴定.H2O2建立氧化损伤模型,取2～3代CMECs,随机分为对照组、200 μmol/L H2O2组、200 μmol/L H2O2+5 U/mL rhEPO组、200 μmol/L H2O2+10 U/mL rhEPO组、200 μmol/L H2O2+20 U/mL rhEPO组.应用MTT法测定细胞存活率,化学比色法测定上清液中乳酸脱氢酶(LDH)含量,Western-blot 检测LC3、Beclin1和p-mTOR含量.结果 大鼠CMECs呈梭形、多角形等不规则形态,形成单层紧密鹅卵石样排列,抗体阳性90％以上;与对照组比较,H2O2处理组存活率降低(P＜0.05),LDH释放量增加(P＜0.05),rhEPO预处理后,与单纯H2O2组比较,上述指标可逆转(P＜0.05);与对照组比较,H2O2处理组LC3Ⅱ和Beclin1表达水平增高(P＜0.05),rhEPO预处理后,LC3Ⅱ和Beclin1含量减低,与单纯H2O2组比较差异有统计学意义(P＜0.05);与对照组比较,单纯H2O2组p-mTOR表达减少(P＜0.05),余H2O2组p-mTOR表达增多(P＜0.05),rhEPO预处理后,与单纯H2O2组比较,诱导p-mTOR表达增高(P＜0.05).结论 rhEPO抑制氧化损伤CEMCs的过度自噬,提高细胞存活率,这种保护作用可能与rhEPO激活PI3K/AKT/mTOR通路有关.