围着床期小鼠子宫Hoxa11,Meis1,Cdh1和Ctnnb1在不同控制性超排卵方案下的表达及相互关系的初步研究

摘要

第一部分控制性超排卵处理的小鼠围着床期子宫内膜Hoxa11，Meis1，Cdn1和Ctnnb1的表达
　　目的：通过检测控制性超排卵处理小鼠围着床期子宫内膜Hoxa11，Meis1，Cdn1和Ctnnb1的表达，评估各超排卵方案对子宫内膜容受性的影响。
　　方法：建立模拟人IVF超排卵方案的小鼠模型，分成四组：对照组，GnRH激动剂组，GnRH拮抗剂组和单纯HMG组，剂量按临床给药换算小鼠使用剂量。在HCG日48小时后取子宫，样本分成两份冻存于-80℃，一份预备提取RNA，一份提取蛋白。从mRNA水平和蛋白水平检测Hoxa11，Meis1，Cdn1和Ctnnb1的表达。
　　结果：Hoxa11，Meis1，Cdh1和Ctnnb1的mRNA和蛋白在控制性超排卵的各组和对照组相比表达都下调。在控制性超排卵的各组中，Hoxa11和Ctnnb1在GnRH激动剂组中表达最低，Meis1和Cdh1在GnRH激动剂和拮抗剂组中的表达明显低于HMG组，且在GnRH激动剂组和拮抗剂组中没有差异。Hoxa11和Ctnnb1的表达在各组中的变化，Meis1和Cdh1在各组中的表达呈阳性相关。
　　结论：控制性超排卵能显著下调Hoxa11，Meis1，Cdh1和Ctnnb1在子宫内膜围着床期的表达。小鼠子宫Cdh1和Ctnnb1的表达有可能与Meis1和Hoxa11的调节相关。
　　第二部分小鼠荧光表达载pEGFP-Hoxa11和pDsRed-Meis1的构建及表达鉴定
　　目的：为了研究Hoxa11和Ctnnb1，Meis1和Cdh1之间是否存在相互调节关系，构建荧光表达载体pEGFP-Hoxa11和pDsRed-Meis1。
　　方法：采用DNA重组技术，将目的基因Hoxa11，Meis1克隆至含有报告基因EGFP和DsRed的pEGFP-N1和pDsRed-N1真核表达中，构建的真核表达载体pEGFP-Hoxa11和pDsRed-Meis1经PCR，双酶切及基因测序鉴定；转染至CHO细胞，荧光显微镜下观察重组质粒的表达，提取细胞蛋白western blot检测蛋白表达。
　　结果：pEGFP-Hoxa11和pDsRed-Meis1重组质粒构建成功。构建的真核表达载体pEGFP-Hoxa11和pDsRed-Meis1能在CHO细胞中有效表达。
　　结论：构建的pEGFP-Hoxa11和pDsRed-Meis1重组质粒能有效表达Hoxa11-EGFP和Meis1-DsRed融合蛋白。
　　第三部分子宫内转染p E G F P-H o x a11及p D s R e d-M e i s1分别使Ctnnb1和Cdh1的表达明显增加
　　目的：研究Hoxa11，Meis1与Cdh1和Ctnnb1在子宫内膜中的相互关系，为探讨其功能奠定基础。
　　方法：将未处理的成熟雌性小鼠和雄性小鼠同笼，发现阴道栓后30-60小时，两侧子宫角注射pEGFP-Hoxa11和pDsRed-Meis1重组质粒及其空白质粒，每组5只。妊娠第5天取小鼠子宫，样本分成三份，一份固定于福尔马林固定剂，备做免疫组化；一份保存于-80℃，备提取蛋白做Western-blot；一份立即做冰冻切片，荧光显微镜下观察融合蛋白的表达。
　　结果：1 Hoxa11-EGFP和Meis1-DsRed融合蛋白在子宫内膜腔上皮细胞，腺细胞和基质细胞有效表达。
　　2 Western-blot鉴定Hoxa11和Meis1的表达，Meis1过表达的子宫内膜Cdh1表达增加，Hoxa11过表达的子宫内膜Ctnnb1表达增加。
　　3免疫组化切片中Meis1过表达的子宫内膜腔上皮细胞和腺细胞膜表面Cdh1表达明显增强。Hoxa11过表达的子宫内膜基质细胞中Ctnnb1的表达明显增强。
　　结论:Hoxa11和Meis1可能与在子宫内膜中Ctnnb1和Cdh1表达的调节有关。

目录

封面

声明

目录

中文摘要

英文摘要

引 言

第一部分控制性超排卵处理的小鼠围着床期子宫内膜Hoxa11， Meis1，Cdh1和Ctnnb1的表达

材料与方法

结 果

附 图

讨 论

第二部分小鼠荧光表达载体pEGFP-Hoxa11和pDsRed-Meis1的构建及表达鉴定

材料和方法

结 果

附 图

讨 论

第三部分子宫内转染pEGFP-Hoxa11及pDsRed-Meis1分别使

材料与方法

结 果

附 图：

讨 论

全文小结

综述

附录1英文缩略词表

附录2攻读学位期间发表论文目录

致谢