RAD001对PIK3CA基因及KRAS基因不同类型人肺NSCLC细胞放射增敏作用研究

摘要

目的：探讨mTOR 蛋白抑制剂RAD001在NSCLC 放疗中的作用，研究其放射增敏作用与PIK3CA基因和KRAS基因状态的关系。
　　 方法：体外培养EGFR 野生型酪氨酸激酶抑制剂（TKI）耐药的人肺非小细胞肺癌细胞株，其中NCI-H661细胞为PIK3CA和KRAS基因双野生型，NCI-H460细胞为PIK3CA和KRAS基因双突变型。应用MTT 法分别检测RAD001 对两株细胞的半数抑制浓度（IC50），确定药物增敏剂量。应用RAD001 作用24h后联合及单独进行X线0、2、4、6、8Gy 照射，分别计算两株细胞克隆存活分数，多靶单击模型拟合生存曲线，计算D0、Dq、SF2 及SER 参数。应用免疫荧光共聚焦分别观察两株细胞RAD001干预组及单纯照射组X线4Gy 照射后0m、30m、60m、4h、12h、24hγ-H2AX 蛋白表达变化情况。应用western blot 进行p-p70S6K 及γ-H2AX 蛋白检测及灰度值定量。
　　 结果：MTT 法检测RAD001 对两株细胞的半抑制浓度(IC50)分别为：NCI-H661(23.101±0.056)nM和NCI-H460 (61.894±0.049)nM，经加权概率法分析存在显著性差异(p＜0.05)。NCI-H661细胞单纯照射组及RAD001 干预组D0、Dq、SF2分别为2.244，1.927，0.712 及1.596，1.369，0.548，SER 为1.406。NCI-H460细胞单纯照射组及RAD001干预组D0、Dq、SF2分别为2.412，2.894，0.851 及2.359，1.848，0.706，SER 为1.022。
　　 免疫荧光共聚焦显微镜检测显示NCI-H661细胞RAD001 干预组24h 时间点γ-H2AX焦点残留增多，NCI-H460细胞中未发现类似改变。RAD001 作用24h后两株细胞p-p70S6K 蛋白表达量均较未加药组降低。NCI-H661细胞RAD001 干预组较单纯照射组24h 时间点γ-H2AX 蛋白表达量增加，NCI-H460细胞RAD001 干预组γ-H2AX 蛋白表达在30m 时间点出现高峰。
　　 结论：RAD001 对人肺非小细胞肺癌细胞株具有放射增敏作用，RAD001的放射增敏作用与PIK3CA和KRAS基因的状态有关，PIK3CA和KRAS基因双野生型的增敏效果较双突变型好。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：英文缩略词表

声明

前言

材料与方法

结果

讨论

参考文献

综述 γ-H2AX 与DNA 双链断裂的关系

致谢