大鼠胸主动脉平滑肌细胞内PARP-1在VDR转录调节中作用的研究

摘要

目的：探讨大鼠胸主动脉平滑肌细胞（VSMCs）内1 型多聚ADP 核糖聚合酶（PARP-1）与维生素D受体（VDR)相互作用及作用方式，以及PARP-1 活性对VDR靶基因（Targetgenes）转录的影响，进而分析PARP-1 活性抑制剂对大血管VSMCs 增殖表型变化的影响。
　　 方法：用组织贴块法体外培养大鼠胸主动脉VSMCs 作为细胞基础模型，利用蛋白免疫印迹法(WB)检测细胞核内PARP-1 及VDR表达水平；用核提取蛋白的免疫共沉淀 (co-IP)，核提取蛋白及重组VDR 蛋白的体外蛋白-蛋白相互作用试验 (Far-WB)和多聚ADP 核糖化试验探讨PARP-1与VDR的相互作用方式（蛋白之间直接结合/PAPR-1 对VDR 进行多聚ADP 核糖化修饰）；分别给予VDR 激动剂1α,25-二羟维生素D3［1α,25(OH)2D3］及不同剂量PARP-1 活性抑制剂3AB或PJ-34 处理VSMCs，利用聚合酶链式反应 (PCR)检测PAPR-1 活性受抑制对VDR 靶基因转录水平的影响。
　　 结果：培养出大鼠胸主动脉VSMCs 并能传代至15代作为研究对象。经75nM1α,25(OH)2D3 处理24h的VSMCs 核提取物中VDR 不能与PARP-1或多聚ADP 核糖修饰的PARP-1 结合，亦不能被PARP-1 多聚ADP 核糖化修饰；经同样处理的VSMCs核提取物中的VDR 不能与重组PARP-1或多聚ADP 核糖修饰的重组PARP-1 结合，亦不能被重组PARP-1 多聚ADP 核糖化；重组VDR 不能与重组PARP-1或多聚ADP核糖修饰的重组PARP-1 结合，亦不能被重组PARP-1 多聚ADP 核糖化。VDR 靶基因Cyp24a1，Vegfa，Hgf的转录水平与PARP-1 活性抑制剂3AB或PJ-34 之间没有明显的剂量相关性，但给予活性抑制剂处理组的VSMCs中Vegfa和 Hgf的转录水平比单独给予1α,25(OH)2D3 处理组更高（P<0.05）。
　　 结论：在经75nM 1α,25-二羟维生素D3 处理的培养的大鼠胸主动脉VSMCs中，VDR对靶基因的转录调控不依赖于与PARP-1的直接作用或多聚ADP 核糖化。抑制PARP-1活性引起的VDR 靶基因Cyp24a1，Vegfa，Hgf的变化很可能由细胞核内能与VDR 及PARP-1 直接作用的其他转录因子调节。PARP-1 活性抑制剂3AB或PJ-34或可促使VSMCs 向增殖表型改变。

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1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

5 结论

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参考文献

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