胞外钙选择性增强阿霉素诱导肝癌细胞死亡

摘要

癌细胞和正常细胞对钙离子存在各自不同的调节机制,这为钙离子与癌症药物的联用提供了一个新的可能。高浓度胞外钙离子导致细胞死亡早有报道,但肝癌细胞和肝细胞对胞外钙离子刺激应答是否有差异还不清楚。本文发现用不同浓度胞外钙离子处理两种细胞后,HepG2细胞增殖抑制率、坏死率、凋亡率以及细胞内钙离子浓度均高于L02细胞。进一步与阿霉素联用的研究发现,胞外钙离子可选择性增强阿霉素诱导HepG2细胞生长抑制,坏死和凋亡,但对L02细胞无显著影响。同时,胞外钙离子显著增强阿霉素诱导两种细胞的胞内钙离子增加,但在增加后两种细胞胞内钙离子终浓度没有差异。我们的结果提示肝癌细胞HepG2比正常肝细胞L02对胞外钙离子更敏感,且胞外钙离子能选择性增强阿霉素诱导HepG2细胞死亡。由此推断,钙离子可能是一种理想的化疗药物增强剂。
　　第一部分:胞外钙离子对HepG2细胞和L02细胞敏感性差异研究
　　目的:探讨胞外钙离子对HepG2细胞和L02细胞细胞活力、凋亡、坏死和胞内钙离子水平影响的差异性,找出两种细胞敏感性差异最大的钙离子剂量。
　　方法:细胞用含不同浓度钙离子和含10％新生牛血清的DMEM(Ca2+4.5mmol/L,Ca2+9mmol/L,Ca2+18mmol/L)处理,通过MTT试验检测细胞活力,流式细胞术(flowcytometry,FCM)检测细胞凋亡率、坏死率和胞内钙离子浓度。
　　结果:对HepG2细胞,与对照组相比,钙离子处理组的抑制率、凋亡率、坏死率均显著升高(P<0.01)。对于L02细胞,4.5mmol/L剂量组,细胞抑制率无明显升高(P>0.05),其余钙离子处理组细胞的抑制率、凋亡率、坏死率均显著升高(P<0.01)。但各个钙离子处理组,HepG2细胞的抑制率、凋亡率、坏死率都显著高于L02细胞(P<0.05)。钙离子处理后,两种细胞胞内钙离子水平均显著增加(P<0.01),各处理组HepG2细胞胞内钙离子水平显著高于L02细胞(P<0.01),但在两种细胞内,各处理组之间钙离子终浓度没有显著差异(P>0.05)。
　　结论:肝癌细胞HepG2和肝细胞L02对胞外钙离子敏感性不同,HepG2细胞对胞外钙离子更敏感。
　　第二部分:胞外钙离子与阿霉素联合对HepG2细胞和L02细胞死亡影响的研究
　　目的:探讨钙离子能否选择性增强阿霉素对HepG2细胞的杀伤作用。
　　方法:细胞用单独和联合含钙离子和药物(含10%新生牛血清)的DMEM(Ca2+9mmol/L,ADM0.1μg/ml,Ca2+9mmol/L+ADM0.1μg/ml)处理,通过MTT试验检测细胞活力,流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率、坏死率和胞内钙离子浓度。
　　结果:单独阿霉素(0.1μg/ml)处理,L02细胞抑制率、凋亡率要明显高于HepG2细胞(P<0.05),两种细胞坏死率没有差异(P>0.05)。钙离子联合阿霉素之后,胞外钙离子显著提高了阿霉素诱导的HepG2细胞抑制率、凋亡率和坏死率,阿霉素和钙离子有显著交互效应(P<0.001),对于L02细胞,胞外钙离子降低阿霉素诱导细胞增殖抑制(P<0.001),凋亡和坏死率均没有影响(P>0.05)。阿霉素处理时,L02细胞胞内钙离子浓度明显高于HepG2细胞(P<0.001),联合之后两种细胞之间胞内钙离子水平均显著增加(P<0.01),但细胞之间没有显著差异(p>0.05)。
　　结论:钙离子能选择性增强阿霉素诱导的肝癌细胞HepG2死亡。

目录

封面

声明

目录

英文缩写词汇表

中文摘要

英文摘要

前 言

第一部分 胞外钙离子对HepG2细胞和L02细胞敏感性差异研究

1. 材料与方法

2. 结果

3. 讨论

第二部分 胞外钙离子与阿霉素联合对HepG2细胞和L02细胞死亡影响的研究

1. 材料与方法

2. 结果

3. 讨论

总 结

参考文献

综述

参考文献

致谢