N-acetylcysteine对鱼藤酮诱导的SH-SY5Y细胞内GAPDH蛋白聚集的作用研究

摘要

目的:观察鱼藤酮诱导的帕金森病细胞损伤模型中是否存在由二硫键交联所致的GAPDH蛋白聚集形成;并探讨N-acetylcysteine(NAC)预处理能否减少此类GAPDH聚集,明确NAC的细胞保护作用。
　　方法:鱼藤酮处理人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞模拟帕金森病细胞损伤模型。采用MTT方法检测细胞活力水平;用免疫荧光技术评价细胞内GAPDH免疫阳性的蛋白聚集情况;通过非还原性westernblotting方法明确细胞内是否存在由二硫键交联所致的GAPDH聚集;最后用NAC预处理SH-SY5Y细胞,评价其在细胞损伤模型中的保护作用,并检测NAC预处理对细胞内由二硫键交联所致GAPDH蛋白聚集的影响。
　　结果:MTT检测细胞活力发现,鱼藤酮处理细胞48小时后能够显著降低细胞活力水平。免疫荧光结果发现,与对照组相比,鱼藤酮处理组细胞内有GAPDH免疫阳性的聚集体存在,而且部分细胞胞核出现被Hoechst33258染料浓染现象。各组细胞蛋白经非还原性westernblotting检测结果显示,模型组细胞内比对照组中的GAPDH寡聚体以及多聚体所占比例更高。不同浓度NAC预处理结果发现,低浓度NAC能够显著减轻鱼藤酮的细胞毒性作用;非还原条件下的westernblotting结果显示低浓度NAC能够减少鱼藤酮诱导的由二硫键交联所致的GAPDH聚集。
　　结论:帕金森病细胞损伤模型中二硫键交联所致的GAPDH聚集水平明显增加;氧化应激反应在帕金森病细胞损伤模型中具有重要作用。NAC能够减少帕金森病细胞损伤模型中GAPDH分子间二硫键交联以及蛋白聚集,并且能够对细胞产生保护作用。

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1． 绪言

2． 实验研究

3．结果分析与讨论

参考文献

5.综述

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