过氧化物酶增殖物激活受体γ激动剂罗格列酮对MC3T3-E1细胞增殖和成骨分化的影响

摘要

目的:
　　1.体外观察罗格列酮(RSG)对MC3T3-E1细胞增殖和成骨分化的影响。并初步探讨其细胞通路机制。
　　2.体外观察观察不同浓度葡萄糖对小鼠原代成骨细胞增殖和细胞分化的影响。并初步探讨其相关的机制。
　　方法:
　　1.于中科院上海细胞库购买MC3T3-E1细胞传代,在终浓度1、5μmol/L的RSG处理细胞,对照组用等量DMSO,培养7天和14天,行碱性磷酸酶(ALP)染色和ALP活性检测,培养21天,行茜素红染色,RealTimePCR检测转录因子Runx2、成骨标志物ALP、骨钙素(OCN)基因的表达;Westernblot检测Runx2、ALP、β-catenin、ERK1/2和p-ERK1/2蛋白的表达。
　　2.取出生24小时内小鼠颅骨原代成骨细胞。使用Ⅰ型胶原免疫荧光染色和VonKossa染色进行鉴定。在终浓度为(5.5mmol/L、15.5mmol/L、25.5mmol/L)葡萄糖处理细胞,观察不同葡萄糖浓度下成骨细胞的细胞增殖、碱性磷酸酶(ALP)活性,RealtimePCR检测转录因子Runx2、成骨标志物ALP、骨钙素(OCN)基因的表达。
　　结果:
　　1.干预组和对照组相比,随着RSG浓度的升高,成骨细胞的增殖能力逐渐减弱;ALP活性减低,ALP染色颜色逐渐变浅,茜素红染色钙结节数目逐渐减少。PCR和Westernblot检测成骨相关指标表达降低,ERK1/2和β-catenin的表达随着RSG浓度的升高而降低。
　　2.15.5mmol/L组和25.5mmol/L组与对照组相比,骨细胞的增殖能力逐渐减弱,并且呈浓度依赖性。培养7天,正常糖组相比,实验组ALP染色颜色逐渐变浅。PCR结果显示Runx2mRNA、OCNmRNA、ALPmRNA表达下降,差异有统计学意义(P<0.05)。
　　结论:
　　1.罗格列酮可剂量依赖性的抑制成骨细胞增殖和成骨分化,这种抑制作用可能是通过Wnt/β-catenin和ERK1/2通路实现的。
　　2.高糖能抑制成骨细胞的增殖和其成熟成骨细胞分化,这可能就是糖尿病患者容易并发骨质疏松的原因之一。

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目录

中文摘要

英文摘要

前言

材料与方法

一．材料

二．方法

结果

1. RSG对MC3T3-E1细胞增殖和凋亡的影响

2. RSG对MC3T3-E1细胞成骨分化的影响

3. RSG对MC3T3-E1细胞成骨活性的影响

4.成骨相关基因和蛋白的表达

5. RSG对Wnt/β-catenin和ERK1/2细胞通路的影响

讨论

参考文献

前言

材料与方法

一，材料

二， 方法

结果

1. 小鼠原代成骨细胞的鉴定：

2．细胞增殖的测定：

3．不同葡萄糖组ALP活性的测定：

4.基因表达的测定：

讨论

参考文献

综述

参考文献

附录一

附录二

致谢