SNIP1在人非小细胞肺癌中的表达以及对肺腺癌细胞A549迁移侵袭能力影响的研究

摘要

【目的】：
　　检测SNIP1蛋白在人非小细胞肺癌组织中的表达,分析其表达水平与淋巴结转移、分期及预后等临床病理特征之间的关系。通过RNA干扰技术,在体外实验中研究SNIP1蛋白表达水平对A549肺腺癌细胞运动和侵袭能力的影响。本课题将增进对非小细胞肺癌迁移和侵袭的过程的理解,为探索新的转移及预后相关标志物、新的治疗靶点提供理论基础。
　　【方法】：
　　收集华中科技大学同济医学院附属同济医院胸外科2012年7月至8月入院并行肺癌根治性切除治疗、术后病理确诊为非小细胞肺癌的患者的癌巢及癌旁肺组织标本13例。购买中国艾丽娜公司含肺癌和部分匹配的转移癌组织以及癌旁正常组织、并有临床分期和生存期资料的组织芯片,含30例肿瘤及10例正常组织。采用免疫组化的方法检测SNIP1蛋白在非小细胞肺癌组织中的表达,结合患者的临床病理资料进行统计分析,探讨SNIP1与非小细胞肺癌临床病理直接的关系。
　　利用干扰RNA技术,在体外实验中下调肺腺癌细胞中SNIP1的表达。通过细胞划痕实验和Transwell实验观察肺腺癌细胞A549中SNIP1表达下降后肺腺癌细胞迁移和侵袭能力的变化,探索SNIP1表达影响非小细胞肺癌患者临床病理的可能机制。
　　【结果】：
　　1.SNIP1蛋白在人非小细胞肺癌组织中的表达
　　免疫组化的方法研究SNIP1蛋白在人非小细胞肺癌组织以及正常组织中的表达。在非小细胞肺癌癌组织中,SNIP1表达阳性率为67.4％(24/43),而正常组织阳性率为23.8%(5/21),经卡方检验P<0.05,两者有统计学差异。小于60岁组SNIP1阳性表达率为59.1%(13/22),大于等于60组SNIP1阳性表达率为52.4%(11/21),两者无统计学意义(P>0.05)。男性患者组SNIP1阳性表达率为54.3%(19/35),女性患者组SNIP1阳性表达率为62.5%(5/8),两者无统计学意义(P>0.05)。腺癌组SNIP1阳性表达率为63.2%(12/19),鳞癌组SNIP1阳性表达率为44.4%(8/18),两者无统计学差异(P>0.05)。无淋巴结转移组SNIP1阳性表达率为36.8%(7/19),有淋巴结转移组SNIP1阳性表达率为70.8%(17/24),两者有统计学差异(P<0.05)。中晚期(Ⅲ期和Ⅳ期)NSCLC中SNIP1阳性表达率76.5%(11/26)明显高于早期(Ⅰ期和Ⅱ期)SNIP1阳性表达率42.3%(13/17),两组相比较具有统计学差异(P<0.05)。结合SNIP1在癌组织中的表达和生存期作生存分析,发现SNIP1表达阳性组低于SNIP1阴性组,两者差异有统计学意义(P<0.05)。
　　2.体外实验中SNIP1对肺腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响
　　用特异针对SNIP1mRNA的小干扰RNA处理肺腺癌细胞A549,在100nM浓度时,A549细胞中SNIP1mRNA及蛋白水平均明显下降。在细胞划痕实验中,随着A549细胞中SNIP1表达下降,A549细胞运动迁移能力下降(用100nMSNIP1-siRNA处理24h后,A549细胞迁移率下降约50%)。在Transwell实验中,随着A549细胞中SNIP1表达下降,A549细胞运动侵袭能力下降(用100nMSNIP1-siRNA处理24h后,穿过基质胶A549细胞数减少约40%)。
　　【结论】：
　　1.人非小细胞肺癌癌组织中SNIP1蛋白表达水比正常肺组织明显增高。
　　2.有淋巴结转移肺癌组织中SNIP1的表达增高,中晚期肺癌组织者中SNIP1的表达增高,SNIP1表达增高者生存期缩短。说明SNIP1的表达与肺癌的淋巴结转移、较晚的分期以及不良预后相关,提示SNIP1可能对肺癌转移、较晚分期及不良预后有预测作用,并且可能在肺癌转移和进展中发挥重要的作用。
　　3.下调肺腺癌细胞中SNIP1的表达,肺腺癌细胞迁移侵袭能力下降。提示SNIP1能影响肺腺癌的迁移侵袭能力,可能在肺腺癌细胞迁移和侵袭能力中发挥重要的作用。
　　4.结合SNIP1蛋白在非小细胞肺癌中表达以及相关体外实验,提示SNIP1可能是与非小细胞肺癌转移预后相关的预测因子,在非小细胞肺癌转移中起着重要作用,可能是非小细胞肺癌的潜在治疗靶点。

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前言

材料和方法

一、材料

二、方法

结果

1． SNIP1在人非小细胞肺癌组织以及正常组织中的表达。

2． SNIP1表达与非小细胞肺癌临床病理特征的关系

3. 转染SNIP1-siRNA对A549细胞SNIP1表达的抑制作用

4． 转染SNIP1-siRNA对A549细胞侵袭和迁移能力的影响

讨论

参考文献

综述

参考文献

致谢