阿霉素通过NF-κB激活诱导足细胞凋亡及FK506的干预机制

摘要

目的：通过检测不同条件下足细胞的活力、凋亡,NF-κB的活性,caspase8、3的活性和Fas的表达,探讨阿霉素诱导足细胞凋亡及他克莫司(FK506)足细胞保护作用机制。
　　材料与方法：体外培养永生化的小鼠足细胞,应用MTT、流式细胞术、ELISA、westernblot检测、分光光度计法、对照组、阿霉素组、FK506+阿霉素组和FK506组,足细胞的活力凋亡、核转录因子(NF-κB)的活性、Fas的表达、caspase8、3的活性。
　　结果：MTT显示正常足细胞(对照组)的活力显著高于阿霉素刺激组(模型组)和干预组(ADR+FK506)(P<0.05),与FK506组相比无差异(P>0.05);流式细胞检测(FCAS)模型组的足细胞凋亡率显著高于对照组、干预组(P<0.05),与FK506组相比无差异(P>0.05);ELISA法检测模型组NF-κB的活性显著高于对照组、干预组(P<0.05),与FK506组相比无差异(P<0.05);westernblot检测Fas的表达模型组显著高于对照组、干预组(P<0.05),与FK506组相比无差异(P>0.05);分光光度法检测模型组caspase8、3的活性显著高于对照组、干预组(P<0.05),与FK506组相比无差异(P>0.05)。
　　结论：阿霉素激活NF-κB诱导Fas的表达,Caspase8、3活性升高,导致足细胞的凋亡。FK506能抑制ADR诱导的NF-κB活性,减少Fas的表达,从而下游Caspase8、3的活性下降,阻止足细胞凋亡。

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前言

材料与方法

一、 材料

1、试剂：

2、仪器设备

3、细胞：特定条件永生化小鼠足细胞由本实验室保存。

方法

一、MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒

二、流式细胞检测

三、ELISA检测小鼠NF-κB

四、凯基全蛋白提取

五、Bradford蛋白浓度测定试剂盒

六、Caspase 8 活性检测试剂盒

七、Caspase 3 活性检测试剂盒

八、Western Blotting

九、小鼠足细胞

十、统计学处理

结果

1、足细胞在不同浓度的ADR和FK506中的活力和FK506预处理后足细胞的活力及凋亡率

2、 FK506干预阿霉素足细胞后NF-KB的活性

3、FK506干预阿霉素足细胞后Fas的表达图8

4、FK506干预阿霉素足细胞后Caspase的活性

讨论

结论

参考文献

综述

致谢