硝基呋喃类代谢物的磁微粒化学发光快速检测技术研究

摘要

本文对磁微粒化学发光法快速检测硝基呋喃类代谢物的技术进行了研究。建立了呋喃类代谢物检测的磁微粒化学发光试剂盒，并对其样品检测的前处理过程进行了优化。
　　首先，通过棋盘法筛选抗原抗体浓度建立磁微粒化学发光酶免疫分析法标准曲线，并对试剂盒进行了分析。呋喃西林代谢物检测的范围为0.05～4μg/kg，IC50值达0.272μg/kg，R2为0.999。呋喃它酮代谢物的检测试剂盒通过对比不同的磁微粒化学发光检测路线的灵敏度和稳定性，最终选择MB-BSA-AMOZ路线，检测范围为0.05～4μg/kg，IC50值达0.2277μg/kg，R2为0.999。
　　对呋喃类代谢物的样品处理过程进行优化，结果表明：样品前处理的主要影响因素为样品水解衍生化的加酸量，样品提取时中和的pH、加热温度和水浴时间等。用制备的呋喃西林阳性鲫鱼样品进行样品前处理条件优化结果表明，与传统的37℃过夜的样品前处理方法相比，加入300μL HCl在75℃水浴30 min进行水解衍生化，然后将pH值调到6进行乙酸乙酯提取，可以有效的缩短样品处理时间，提高样品的提取效率，更适合样品的快速检测。
　　在此样品处理条件下，呋喃西林样品加标0.5、1、2μg/kg的样品处理回收率为96～113％，变异系数≤9%，检测限≤0.08μg/kg。呋喃西林代谢物阳性样品的磁微粒化学发光酶免疫分析法检测结果与ELISA试剂盒检测结果呈良好的相关性，说明此方法有效可行。
　　呋喃类药物残留的磁微粒化学发光快速检测技术具有灵敏度高，特异性强，检测速度快和再现性好等特点，因此适合大批量的样品的快速筛选，在食品快速检测方面具有广阔的应用前景。

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1 绪 论

1.1 引言

1.2 呋喃类药物概述

1.3 呋喃类药物代谢物检测方法

1.4 呋喃类代谢物样品前处理方法研究进展

1.5 磁微粒化学发光法的原理及应用

1.6 本文的研究意义和目的

2 呋喃西林快检方法的初步研究

2.1 仪器与试剂

2.2 实验方法

2.3 结果与讨论

2.4 本章小结

3 样品水解衍生化条件的优化

3.1 仪器与试剂

3.2 实验方法

3.3 结果与讨论

3.4 本章小结

4 磁微粒化学发光试剂盒的优化与组装

4.1 仪器与试剂

4.2 实验方法

4.3 结果与讨论

4.4 本章小结

5 全文总结与展望

致谢

参考文献