红景天苷靶向COX-2抑制日光性皮炎的机制研究

摘要

目的：
　　探讨红景天苷抑制日光性皮炎的分子机制。
　　方法：
　　（1）通过免疫组织化学技术（IHC)分析临床日光性皮炎标本中与日光紫外线（SUV）相关MAPK通路因子p-JNKs，p-p38和炎症因子Ki67，CD45，COX-2的表达。
　　（2）选取适宜的SUV照射剂量（不引起细胞凋亡），对JB6 Cl41（小鼠上皮细胞）和HaCaT（人角质形成细胞）进行处理，用western blot检测p-p38，p-JNKs和COX-2的表达。
　　（3）在HaCaT细胞中采用基因沉默技术使COX-2表达下调，观察MAPK通路因子p-p38，p-JNKs的变化。
　　（4）采用同源建模和分子对接方法预测COX-2的抑制剂，以及相互作用的位点。
　　（5）采用体外药物蛋白结合技术（invitro pull-down assay)，检测红景天苷能否与COX-2结合。
　　（6）MTS方法测定细胞存活率，观察红景天苷对细胞是否有毒性。
　　（7）选取不同浓度的红景天苷和适宜浓度不同时间段预处理JB6 Cl41和HaCaT细胞，SUV照射后，收集细胞培养上清，酶联免疫吸附实验（ELISA）测定红景天苷是否抑制COX-2活性，即下游PGE2的产生以及炎症因子IL-6和TNF-α水平；提取细胞总蛋白，采用western blot分析红景天苷对细胞MAPK通路因子及COX-2的作用。
　　（8）建立小鼠日光性皮炎模型，在小鼠背部皮肤处涂抹红景天苷或者丙酮，然后进行SUV照射，取皮肤组织进行H-E染色观察皮肤炎症的病理变化，以及免疫组化技术来分析皮肤组织中COX-2，p-p38，p-JNKs的表达变化。
　　结果：
　　（1）COX-2，p-JNKs，p-p38，Ki67和CD45在日光性皮炎中表达上调。
　　（2）SUV诱导HaCaT和JB6 Cl41细胞中COX-2，p-p38和p-JNK的表达增加。
　　（3）在HaCaT细胞中沉默COX-2后，SUV诱导的p38或JNKs的磷酸化水平下降。
　　（4）红景天苷在体外与COX-2直接结合且对HaCaT和JB6 Cl41细胞无毒性。
　　（5）红景天苷抑制COX-2的活性，减轻SUV辐射引起的HaCaT和JB6 Cl41细胞炎症反应。
　　（6）红景天苷预处理过的小鼠皮肤经SUV照射后，皮肤组织表层明显增厚，炎症细胞减少，COX-2，p-p38和p-JNKs的表达均有减少。
　　结论：
　　红景天苷可靶向COX-2抑制日光性皮炎。红景天苷作为潜在的COX-2抑制剂，有助于改善皮肤光损伤和治疗光敏性皮肤疾病。为开发天然安全的中药防护剂和临床日光性皮肤炎症的治疗提供了科学依据。