芍药醇通过靶向TOPK抑制日光性皮炎

摘要

目的：
　　过度紫外线照射与许多皮肤疾病有关，比如日光性皮炎，光老化和皮肤癌。p38和JNK是MAPK家族的两名重要成员，紫外线照射可以导致二者的磷酸化，从而诱发和促进炎症。TOPK作为p38和JNK的上游激酶也在日光性皮炎中发挥着重要作用，靶向TOPK并抑制其活性已经成为一种治疗日光性皮炎的策略。因此我们希望找到一种新的TOPK抑制剂来治疗日光性皮炎。
　　方法：
　　1、用H＆E染色和IHC检测病人皮肤病理改变及TOPK，p-p38，p-JNKs的表达情况。
　　2、用western blot检测HaCat和JB6细胞在SUV照射后p-p38，p-JNKs的表达情况。
　　3、用MTS检测芍药醇对HaCat和JB6细胞活性的影响情况。
　　4、用MST检测芍药醇在体外与TOPK的结合能力。
　　5、体外激酶实验检测芍药醇对TOPK活性的抑制能力。
　　6、用western blot检测芍药醇在HaCat和JB6细胞中对TOPK下游通路的抑制情况。
　　7、用ELISA检测芍药醇在HaCat和JB6细胞中对SUV诱导的炎症相关因子IL-6和TNF-α的抑制情况。
　　8、用western blot检测芍药醇在Babl/c小鼠皮肤中对SUV诱导的p-p38，p-JNK，γ-H2AX的表达的影响。
　　9、用ELISA检测芍药醇在Babl/c小鼠皮肤中对SUV诱导的炎症相关因子IL-6和TNF-α的抑制情况。
　　结果：
　　1、临床数据表明，日光性皮炎病人皮肤具有炎性特征并且TOPK，p-p38，p-JNKs的表达增高。
　　2、HaCat和JB6细胞在SUV照射后p-p38，p-JNKs的表达以时间和剂量依赖的方式增高。
　　3、MTS实验表明，芍药醇对HaCat和JB6细胞的活性没有明显影响。
　　4、MST实验表明，芍药醇在体外和TOPK蛋白具有较强的结合能力。
　　5、体外激酶实验表明，芍药醇可以以浓度依赖的方式抑制TOPK激酶的活性。
　　6、细胞实验表明，芍药醇可以以时间和剂量依赖的方式抑制SUV刺激后p-TOPK，p-MSK1，γ-H2AX的表达增加。
　　7、ELISA实验表明，芍药醇可以在HaCat和JB6细胞中抑制SUV诱导的IL-6和TNF-α的分泌增加。
　　8、动物实验表明，芍药醇可以抑制SUV刺激后p-p38，p-JNKs，γ-H2AX的表达增加。
　　9、ELISA实验表明，芍药醇可以抑制Babl/c小鼠皮肤在SUV刺激后IL-6和TNF-α的分泌增加。
　　结论：
　　芍药醇可以通过靶向TOPK抑制日光性皮炎，它有可能作为一种治疗日光性皮炎的有效成分应用于临床。

目录

声明

英语缩略词汇

前言

材料与方法

1.实验仪器：

2. 主要试剂：

3.主要试剂的配制：

4.技术路线：

5．主要实验方法：

结果

1. HaCat和JB6细胞在紫外照射后，p-p38和p-JNKs以剂量和时间依赖的方式表达增加。

2.芍药醇可以与TOPK结合并抑制其活性

3.芍药醇下调了紫外线诱发的JNK和p38激酶的活化

4.在JB6和HaCat细胞中，芍药醇以时间和剂量依赖的方式下调紫外线诱发的 TOPK下游通路的活化水平，并且抑制炎性因子的分泌

5.芍药醇在在体实验中抑制了日光性皮炎

讨论

参考文献

综述：部分紫外线引起的DNA损伤与皮肤疾病

附录

致谢