VHL综合征家系临床特征及VHL基因突变功能研究

摘要

目的：Von Hippel-Lindau（VHL）综合征是最为常见的遗传性肾癌，是一种由生殖细胞VHL基因突变导致的常染色体显性遗传性肿瘤综合征。VHL综合征患者基因型、蛋白功能、以及临床表型的关系尚不明确。本研究将通过分析三个中国VHL综合征家系的临床发病特征，并检测这些家系的基因突变位点，探究突变基因的功能，旨在为VHL综合征的诊断和治疗提供实验依据。 方法：调查3例先证者所在家系，通过病史和系统性影像学检查，获得家族成员相关疾病症状的发生情况，绘制相应的遗传系谱图。采集家族成员外周血，应用聚合酶链反应（PCR）体外扩增VHL基因片段，Sanger测序检测基因突变。免疫组化检测肿瘤及癌旁组织中相关蛋白的表达情况。构建VHL突变体过表达载体，利用Western blot、Real-Time PCR、流式细胞术、EdU细胞增殖检测探究突变基因在肾癌细胞系中的功能。 结果：（1）包括先证者在内，3个家系共8例VHL综合征患者，均为VHL-1型，2例患者（2-Ⅱ-3和2-Ⅱ-4）死于脑血管母细胞瘤。（2）所有患者均检测到VHL基因突变，家族1突变方式为1号外显子第193位碱基T突变为碱基C，导致VHL蛋白（pVHL）第65位丝氨酸替换为脯氨酸，表示为c.193T＞C（p.Ser65Pro）；家族2是1号外显子c.269A＞T（p.Asn90Ile）；家族3是2号外显子c.463G＞A（p.Val155Met）。（3）患者1-Ⅲ-1肾癌和血管母细胞瘤组织中缺氧诱导因子HIF-1α和HIF-2α表达明显升高。体外实验发现：在正常氧浓度下，与野生型VHL相比，VHLc.193T＞C突变体对HIF-2a表达的抑制作用明显减弱，诱导肿瘤细胞凋亡和抑制肿瘤细胞增殖的能力减弱。 结论：（1）基因检测是诊断该疾病的金标准，在早期筛查无症状患者和突变基因携带者中起着重要作用。（2）3个家族的基因突变均为致病突变，临床表现为VHL-1型。（3）Ser-65对维持pVHL功能十分重要，VHL c.193T＞C突变导致pVHL功能缺陷和HIF累积可能在VHL综合征相关的肾癌和血管母细胞瘤的发生发展中起到一定的作用。

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