1.雷帕霉素通过TGF-β-Smad2信号通路上调肝脏祖细胞中CTGF的表达；2.自分泌的TGF-β/activin A-Smad信号通路诱导肝脏祖细胞呈现部分上皮间质转化状态

摘要

文章主要从以下几部分进行论述： 第一部分：雷帕霉素通过TGF-β-Smad2信号通路上调肝脏祖细胞中CTGF的表达 目的：雷帕霉素是mTOR激酶抑制剂，目前作为免疫抑制剂广泛用于器官移植术后的抗排斥反应。最近的研究表明雷帕霉素在器官纤维化的过程中有一定的促纤维化效应，但其在肝纤维中的确切作用仍有待研究。 方法：用Western blotting来检测肝脏祖细胞中CTGF的表达，mTOR信号通路，PI3K-Akt信号通路和TGF-β-Smad信号通路的变化。用双荧光素报告基因实验检测CTGF启动子和Smad结合元件的激活情况。用慢病毒介导的shRNA稳定敲减了肝脏祖细胞中的mTOR，Raptor，Rictor，Smad2，Smad3和Smad4，用腺病毒过表达肝脏祖细胞中的Smad3，来研究这些基因在雷帕霉素诱导CTGF表达中的作用。使用各种激酶抑制剂来验证激活通路在雷帕霉素诱导CTGF表达中的作用。用DCFH-DA来检测雷帕霉素处理后ROS的变化。 结果：雷帕霉素可在转录水平上调肝脏祖细胞中CTGF的表达，敲减mTOR，Raptor和Rictor模拟了雷帕霉素处理的效应。机制上，雷帕霉素通过抑制mTOR活性而导致PI3K-Akt信号通路的负反馈激活，但这种激活在一定程度上起了限制雷帕霉素诱导的CTGF表达的作用。此外，雷帕霉素可以激活TGF-β-Smad信号通路，而TGF-βI型受体丝苏氨酸激酶抑制剂可以完全阻断雷帕霉素的效应。进一步研究表明，雷帕霉素激活TGF-β-Smad信号通路导致的CTGF表达主要由Smad2介导，敲减Smad2可以在很大程度上抑制雷帕霉素诱导的CTGF上调，敲减Smad4有部分抑制效应，而敲减Smad3则没有明显效应。最后，雷帕霉素通过诱导ROS产生来活化前体TGF-β进而激活TGF-β-Smad2信号通路来促进CTGF的表达。 结论：雷帕霉素通过上调肝脏祖细胞中CTGF表达发挥潜在的促纤维化作用，提示我们临床上使用雷帕霉素时应持谨慎态度。 第二部分：自分泌的TGF-β/activin A-Smad信号通路诱导肝脏祖细胞呈现部分上皮间质转化状态 肝脏祖细胞（Hepatic progenitor cells，HPCs）是一种通常在慢性肝损伤时扩增的细胞，其通过分化成肝细胞和胆管细胞参与肝脏再生。上皮间质转化（Epithelial-mesenchymal transition，EMT）是一个动态的过程，其在肝纤维化和肝癌起始过程中扮演着非常重要的作用。本研究发现肝脏祖细胞（LE/6，WB-F344细胞）呈现部分上皮间质转化状态，并且其上皮标志物（zona occludin1和E-cadherin），间质标记物（fibronectin,vimentin,collagen-1和α-SMA）的表达也与此种状态相符。自分泌的TGF-β和activin A参与维持肝脏祖细胞的这种部分EMT状态。此外，TGF-β和activin A的共同经典下游，Smad信号通路也参与到维持部分EMT状态。这些研究结果证实了肝脏祖细胞部分EMT状态的存在，揭示了一些参与其中的自分泌的信号通路，有助于未来进一步研究和探索肝脏祖细胞在肝纤维化和肝癌的发生过程中的作用。

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