声明
1 前言
1.1 心脏病与心律失常
1.2 房颤
1.2.1 房颤简介
1.2.2 房颤与钠离子通道
1.2.3 房颤与钾离子通道
1.2.4 房颤与非离子通道
1.3 LMNA基因与疾病
1.3.1 LMNA基因简介
1.3.2 LMNA与早衰（HGPS）
1.3.3 LMNA与扩张型心肌病（DCM）
1.3.4 LMNA与肌肉萎缩症（EDMD）
1.3.5 LMNA与脂代谢异常病（FPLD）
1.3.6 LMNA基因与房颤
1.4 本研究的内容与意义
2 实验研究材料与方法
2.1 实验材料
2.1.1 研究对象
2.1.2 实验中的主要仪器设备
2.1.3实验中的主要试剂和药品及试剂盒
2.1.4 实验中主要使用的网站和软件
2.2 实验方法
2.2.1 研究对象及LMNA基因突变筛选
2.2.2 病人基因组样本全外显子组测序分析
2.2.3 质粒的构建和提取
2.2.4 抗体信息
2.2.5 细胞的培养及转染
2.2.6 免疫荧光实验
2.2.7 细胞压力应激实验
2.2.8稳态条件（steady state）下核孔复合物（NPC）核质运输实验（Nucleocytoplasmic trafficking assays）
2.2.9 核膜（NE）蛋白的抽提及氯化钠梯度抽提实验
2.2.10 总蛋白，核膜蛋白及胞质蛋白的提取
2.2.11 细胞膜蛋白的分离
2.2.12 HSP70 mRNA出核与HSP70蛋白入核实验
2.2.13离子通道电流的电生理记录实验
2.2.14GST pull-down实验（GST pull-down assay）
2.2.15蛋白质免疫共沉淀实验（Co-IP）
2.2.16 末端脱氧核苷酸转移酶介导的原位缺口标记法实验（terminal deoxyribonucleotidyl transferasemediated dUTP nick end labeling，TUNEL)
2.3 数据整理与分析
3 实验结果
3.1 突变位点的发现
3.1.1 孤立性房颤病人LMNA基因的遗传突变筛选及p.Arg399Cys突变的发现
3.2 LMNA基因p.Arg399Cys突变对亚细胞定位及核膜功能的影响
3.2.1LMNA基因p.Arg399Cys突变导致HL-1细胞中lamin A蛋白的定位异常
3.2.2 LMNA基因p.Arg399Cys突变在细胞应激状态下不影响核膜的完整性
3.2.3 LMNA p.Arg399Cys突变不影响经典的出入核转运通路
3.3Lamin A与NUP155相互作用的验证
3.3.1Lamin A与核孔蛋白NUP155存在相互作用
3.3.2 LMNA基因C端与NUP155相互作用具体区域的确定
3.3.3LMNA基因的p.Arg399Cys突变减弱了lamin A与NUP155的相互结合
3.3.4 LMNA基因的p.Arg399Cys突变增加了NUP155核膜的可抽提性
3.4 LMNA基因的p.Arg399Cys突变抑制HSP70 mRNA的出核和HSP70蛋白的入核
3.5 LMNA基因的p.Arg399Cys突变对钠、钾电流的影响
3.5.1 LMNA基因的p.Arg399Cys突变降低了HEK293/Nav1.5细胞中心肌钠电流密度
3.5.2 LMNA基因的p.Arg399Cys突变对钾电流没有影响
3.5.3 LMNA基因的p.Arg399Cys突变降低了HEK293/Nav1.5细胞膜上Nav1.5蛋白的表达量
4 讨论
5 全文总结与展望
5.1 全文总结
5.2 展望
致谢
参考文献
附录1 攻读博士学位期间发表的论文
附录2 本文主要英文缩略词
附录3 LMNA相关的核纤层蛋白病表型异质性的总结
附录4 已报道的房颤相关的LMNA突变的总结
