苦荞碱性提取物的液质联用分析及其对2型糖尿病大鼠降糖作用机制研究

摘要

目的：研究苦荞麦碱性提取物的化学成分及其对2型糖尿病大鼠降糖作用，并对其作用机制进行初步探讨，为今后临床应用提供依据。
　　方法：
　　1.苦荞碱性提取物的液质联用分析
　　将50 kg的苦荞籽粒回流提取，静置，浓缩，过滤，通过阴阳离子树脂进行柱层析处理，得到碱性提取物。采用液质联用技术对苦荞碱性提取物中主要化学成分进行分析。
　　2.苦荞碱性提取物对2型糖尿病大鼠降糖作用
　　健康SD大鼠（雄性，SPF级）80只，适应性喂养1周后随机分为2组，即正常组8只、高糖高脂组72只。正常组给予普通饲料喂养。高糖高脂组给予高糖高脂饲料喂养，喂养4周后，腹腔注射1％的链脲佐菌素35 mg/kg造2型糖尿病模型，7日后断尾取血检测，以空腹血糖值>=11.1mmol/L为复制模型成功。将40只成模大鼠随机分为5组，即模型组，苦荞碱性提取物低剂量（43 mg/kg）组，苦荞碱性提取物高剂量(86 mg/kg)组，二甲双胍（140 mg/kg）组，阿卡波糖（32 mg/kg）组，每组8只。各组大鼠每天灌胃给药2次，连续灌胃6周，每周测量各组大鼠体重、饮食、饮水并记录。给药第1，2，4，6周测量各组大鼠血糖值及尿量，末次给药前12 h禁食不禁水。颈总动脉取血，留取血清备检；取血后迅速钝性剥离肾脏、心脏、胰腺、肝脏等组织，用滤纸吸干水分，精密称重，计算脏器指数（脏器指数=脏器质量/体质量），取部分组织用4%多聚甲醛溶液固定，进行HE染色切片，然后在光学显微镜下观察组织形态结构，剩余组织-80℃保存。
　　3.苦荞碱性提取物对2型糖尿病大鼠降糖作用机制研究
　　取浓度分别为62.5 mg/L，125 mg/L，250 mg/L，500 mg/L，1000 mg/L的阿卡波糖和苦荞碱性提取物采用4-硝基酚-α-D-吡喃葡萄糖苷(PNPG)法测定α-葡萄糖苷酶的活性。
　　取大鼠肝脏组织，提取肝脏组织RNA。采用实时荧光定量PCR技术，检测肝脏组织AMPK，PI3K，Akt的mRNA相对表达量；同时，采用蛋白免疫印迹杂交技术检测肝脏组织中PI3K，Akt的蛋白相对表达量。
　　结果:
　　1. HPLC-MS分析结果显示，苦荞碱性提取物中含有7种肽类聚合物成分和一种多羟基生物碱。
　　2.苦荞碱性提取物低剂量组，苦荞碱性提取物高剂量组可以明显的降低2型糖尿病大鼠的血糖、减少大鼠饮水量、进食量、降低血清胰岛素水平、胰岛素抵抗指数和血液糖化血红蛋白水平。
　　3.各给药组与模型组的大鼠肾脏指数、心脏指数、肝脏指数比较无显著性差异，模型组的大鼠的胰腺指数高于正常组的大鼠。
　　4.病理学检查显示，各组大鼠的心脏和肾脏无明显病变，模型组大鼠胰岛大小小于正常组，肝脏出现脂肪肝，给药后，大鼠病变有所改善。
　　5.苦荞碱性提取物对 a-葡萄糖苷酶的半数抑制率为116.468±1.065 mg/L。大鼠肝脏中PI3K和Akt基因表达量明显上升，AMPK基因表达量升高但没有显著性。大鼠肝脏中 PI3K和 Akt蛋白及 p-PI3K和p-Akt明显升高。
　　结论:
　　1、苦荞碱性提取物中含有以天冬氨酸为母核的7种聚合寡肽和荞麦碱。
　　2、苦荞碱性提取物能降低2型糖尿病大鼠的血糖，并能改善胰岛功能，增加胰岛素敏感能力。
　　3、苦荞碱性提取物可能是其通过对a-葡萄糖苷酶的抑制作用，同时调节PI3K-Akt信号通路，上调PI3K、Akt基因和蛋白水平的表达从而改善2型糖尿病大鼠。

目录

声明

缩略词表

前言

第一部分 FTAE的提取分离及HPLC-MS分析

1 实验材料

2 实验方法

3 实验结果

4 讨论

5 小结

第二部分FTAE对2型糖尿病模型大鼠的降糖作用

1 仪器与材料

2 实验方法

3 实验结果

4 讨论

5 小结

第三部分 FTAE降糖作用机制研究

1 仪器与材料

2 实验方法

3 实验结果

4 讨论

5 小结

结语

参考文献

附录

一 文献综述:苦荞麦的化学成分与药理作用研究进展

二 攻读硕士期间发表论文情况

致谢