苦丁茶中异绿原酸的提取纯化工艺及其抗类风湿关节炎的药效学研究

摘要

苦丁茶是我国民间传统的药食两用植物，异绿原酸是其主要活性成分之一，研究表明苦丁茶中异绿原酸类化合物具有良好的抗炎功效，但对其抗类风湿关节炎的研究较少，本课题将对苦丁茶中异绿原酸的提取纯化工艺及抗类风湿关节炎的作用进行研究。
　　为测定苦丁茶中异绿原酸的含量，采用高效液相色谱法进行检测，色谱条件为：流速1.0 mL/min；柱温40℃；进样量10μL；检测波长为325 nm。结果表明：苦丁茶中三种异绿原酸的进样量在0.02μg～2.00μg范围内均呈现良好的线性关系，稳定性、精密度、重复性和加样回收率结果良好，符合定量分析的要求。本试验所建立的含量测定方法准确可靠、重复性好，为苦丁茶中异绿原酸的进一步研究应用提供了依据。
　　为充分提取苦丁茶中的异绿原酸成分，选用水提取的方法，并运用L9（34）正交试验设计对苦丁茶中异绿原酸水提工艺条件进行优化，以总异绿原酸含量为指标，采用高效液相色谱法测定含量。结果表明，第1次补足1.83倍吸水量后加10倍量水，浸泡2 h，其余每次加10倍量水，共提取3次，每次煎煮1 h,为苦丁茶中异绿原酸的最佳水提工艺。
　　为纯化、富集苦丁茶中的异绿原酸成分，优化苦丁茶中异绿原酸纯化、富集工艺参数，运用柱层析的方法，通过静态吸附和解吸附试验筛选出最佳树脂为MCI-GEL HP50SS，并通过吸附和解吸附试验对纯化工艺参数进行了考察，结果为：采用湿法上样，上样柱温30℃，上样流速为3 BV/h，上样液浓度为4.32 mg/mL，上样液量为10 mL，洗脱流速为3 BV/h，先用5 BV水洗脱除杂，再用30％乙醇溶液洗脱10 BV，可较好地纯化富集苦丁茶中异绿原酸，经树脂纯化后的干燥品中总异绿原酸的纯度为82.30％，纯化倍数为9.53，总异绿原酸的纯化保留率为73.40%。
　　为研究苦丁茶中异绿原酸抗类风湿关节炎作用，采用足趾注入完全弗氏佐剂的方法制备小鼠类风湿关节炎模型，尾静脉注射给予高、中、低剂量异绿原酸溶液和阳性对照药醋酸地塞米松溶液，通过比较各组小鼠的类风湿关节炎检测指标来评价苦丁茶中异绿原酸抗类风湿关节炎的作用。结果如下：
　　小鼠足趾肿胀抑制率结果显示，正常对照组小鼠在整个实验过程中未出现关节炎症状，其他各组则有不同程度的关节肿胀症状表现。实验结果表明，阳性对照组和异绿原酸中、高剂量组均对小鼠足肿胀有明显的抑制作用，与模型组对比具有极显著差异(P<0.01)，其对小鼠足肿胀抑制率依次为：77.33%、57.11%、79.51%；苦丁茶中异绿原酸低剂量组对小鼠足肿胀有抑制作用，与模型组对比具有显著性差异(P<0.05)，其对小鼠足肿胀抑制率为9.85%。
　　组织病理学检查结果显示，正常对照组小鼠组织切片骨结构完整，未见任何组织肿胀和病变。与正常对照组比较，模型组小鼠皮下组织弥漫性炎症，伴大量炎性细胞浸润。与模型组比较，异绿原酸各给药剂量组和阳性对照组均能不同程度减轻佐剂性关节炎小鼠炎症症状，减少炎性细胞浸润。异绿原酸高剂量组的疗效相对于阳性对照组更为显著，彻底遏制了佐剂性关节炎小鼠足部组织病理改变，这一结果表明，异绿原酸对佐剂诱导的AA具有确切的治疗作用，能有效抑制炎性细胞浸润，从而减轻炎症反应，对关节组织的破坏、损伤产生积极的改善和保护作用。
　　血清生化指标测定结果显示，阳性对照组和异绿原酸中、高剂量组小鼠血清中NO水平均显著降低，与模型组相比差异显著(P<0.05)；阳性对照组和异绿原酸中、高剂量组小鼠血清中PGE2水平均显著降低，与模型组比较差异显著(P<0.05)。
　　本试验通过对苦丁茶中异绿原酸的提取纯化工艺研究，得到了纯度较高的苦丁茶异绿原酸，通过对佐剂性关节炎小鼠动物实验研究，发现苦丁茶异绿原酸具有良好的抗类风湿关节炎药理作用，为苦丁茶异绿原酸的进一步研究奠定了良好的基础，提供了一定的科学依据。

目录

声明

缩略词表

前言

第一部分 苦丁茶中异绿原酸的含量测定方法研究

1 材料与仪器

2 方法与结果

3 讨论

第二部分 正交试验法优选苦丁茶中异绿原酸的水提工艺

1 材料与仪器

2 方法与结果

3 讨论

第三部分 苦丁茶中异绿原酸的纯化工艺研究

1 材料与仪器

2 实验方法

3 结果与分析

4 讨论

第四部分 苦丁茶中异绿原酸抗类风湿关节炎的药效学研究

1 材料与仪器

2 方法

3 结果与分析

4 讨论

文献综述

1 苦丁茶的研究进展

2 异绿原酸的研究进展

3 展望

结语与创新

参考文献

附录

致谢