(Z)-2-硝基-二苯并[b,d]氧杂-7(6H)-酮肟诱导肝癌HepG2细胞凋亡机制的初步研究

摘要

采用MTT法检测合成的36种联苯化合物的细胞毒性，发现(Z)-2-硝基-二苯并[b,d]氧杂-7(6H)-酮肟(NOO)的对HepG2细胞的IC50值最小，因此考察了(Z)-2-硝基-二苯并[b，d]氧杂-7(6H)-酮肟对肝癌HepG2细胞的作用，并对相关机制进行初步探讨。随后采用荧光染色方法初步判断(Z）-2-硝基-二苯并[b，d]氧杂-7(6H)-酮肟诱导细胞凋亡，再通过DNA电泳，蛋白免疫印迹及线粒体膜电位分析考察(Z)-2-硝基-二苯并[b，d]氧杂-7(6H)-酮肟诱导肿瘤细胞凋亡的初步究发现，(Z)-2-硝基-二苯并[b，d]氧杂-7(6H)-酮肟对HepG2细胞的增殖抑制作用具有时间和剂量依赖性。荧光染色和DNA电泳结果表明(Z)-2-硝基-二苯并[b，d]氧杂-7(6H)-酮肟作用后的细胞产生了凋亡小体及DNA片段化等明显的凋亡特征，表明(Z)-2-硝基-二苯并[b，d]氧杂-7(6H)-酮肟可诱导HepG2细胞凋亡。流式分析和蛋白印迹结果进一步表明，(Z)-2-硝基-二苯并[b，d]氧杂-7(6H)-酮肟可导致线粒体膜电位降低，procaspase-3、procaspase-9和Bcl-2蛋白的表达降低，说明caspase-3和caspase-9蛋白被激活。而且，NAC可以抑制(Z)-2-硝基-二苯并[b，d]氧杂-7(6H)-酮肟诱导的肝癌HepG2细胞死亡，证明细胞氧化损伤引起ROS(reactive oxygen species)的释放。
　　以上所有结果表明(Z)-2-硝基-二苯并[b，d]氧杂-7(6H)-酮肟可通过线粒体途径诱导HepG2细胞凋亡，但其确切的作用机制还需要更深入的研究。

目录

摘要

符号说明

第1章 绪论

1．1 抗肿瘤药物的分类

1．1．1 细胞毒类药物

1．1．2 分子靶向药物

1．2 细胞凋亡

1．2．1 定义

1．2．2 凋亡形态上的特征

1．2．3 影响凋亡的途径

1．2．4 影响凋亡的因素

1．3 联苯类物质的研究进展及本论文的研究意义

第2章 新合成的联苯化合物及常用检测方法

2．1 新合成的联苯类化合物

2．2 肿瘤的培养

2．3 检测凋亡的手段

2．3．1 检测活力

2．3．2 形态的检测

2．3．3 凋亡生化学特征检的测法

2．4 小结

第3章 (Z)-2-硝基-二苯并[b，d]氧杂-7(6H)-酮肟对人肝癌HepG2细胞凋亡机制的初步研究

3．1 实验

3．1．1 材料

3．1．2 实验

3．2 结果

3．2．1 活性筛选

3．2．2 (Z)-2-硝基-二苯并[b，d]氧杂-7(6H)-酮肟对多种肿瘤细胞生长的抑制作用

3．2．3 (Z)-2-硝基-二苯并[b，d]氧杂-7(6H)-酮肟对肝癌HepG2细胞集落形成的影晌

3．2．4 (Z)-2-硝基-二苯并[b，d]氧杂-7(6H)-酮肟对人肝癌HepG2细胞形态学的影响

3．2．5 (Z)-2-硝基-二苯并[b，d]氧杂-7(6H)-酮肟诱导人肝癌HepG2细胞的DNA片段化

3．2．6 (Z)-2-硝基-二苯并[b，d]氧杂-7(6H)-酮肟对人肝癌HepG2细胞线粒体膜电位的影响

3．2．7 (Z)-2-硝基-二苯并[b，d]氧杂-7(6H)-酮肟对人肝癌HepG2细胞凋亡相关蛋白表达的影响

3．2．8 抗氧化剂，抗氧化酶(Z)-2-硝基-二苯并[b，d]氧杂-7(6H)-酮肟细胞毒作用的影响

3．3 小结

结论

展望

参考文献

致谢

攻读硕士学位期间发表的学术论文

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