孔石莼中体外抗氧化活性物质的研究

摘要

孔石莼是一种大型海洋经济绿藻,在我国资源十分丰富。其味道鲜美,具有很高的营养价值与药用价值。近些年来,孔石莼的工厂化育苗与人工养殖技术日趋完善,但关于它生物活性的研究还处于起步阶段,远远跟不上养殖栽培的步伐,尤其是抗氧化生物活性,亟待开展研究工作对其进行系统评价。
　　本论文选取孔石莼作为研究对象,以自由基清除能力为体外抗氧化评价指标,筛选、分离、鉴定了孔石莼中的抗氧化物质,以期将孔石莼抗氧化活性的研究成果应用到天然抗氧化剂、疾病治疗药物的开发上来。本研究主要取得如下研究成果:
　　(1)采用超声辅助提取技术,用乙醇水溶液对孔石莼进行了提取,研究考察了浸提温度、浸提料液比、乙醇浓度、超声时间对可溶性固形物得率的影响,通过一系列单因素试验及正交试验分析,对孔石莼粗提物的提取条件进行了优化,并对优化结果进行了验证。结果表明,最佳的提取条件为:浸提温度60℃、浸提料液比1:25g/ml、乙醇浓度60％、超声时间2h;在此条件下,孔石莼中可溶性固形物的平均得率为11.81%,相对标准偏差(RSD)为0.53%,表明结果具有较高的精密度与可靠性。
　　(2)采用液—液萃取方法对孔石莼的粗提物进行初步分离,以ABTS自由基清除能力、羟基自由基清除能力、DPPH自由基清除能力为检测指标进行综合分析。结果显示,正丁醇层具有较好的抗氧化能力。实验选用D101型大孔树脂对正丁醇层做进一步的分离纯化,用不同浓度的乙醇溶液进行梯度洗脱,洗脱组分检测其对自由基的清除能力,最终筛选出抗氧化能力较强的SR-50组分作下一步的研究分析。为了得到较纯的目标产物,研究首次应用中压液相色谱快速纯化工艺,系统分离纯化了SR-50组分,在最适的洗脱条件(氯甲比=94:6)下,纯化得到了SR-50-I组分,进行相应抗氧化能力的分析,发现SR-50-I组分对ABTS自由基、羟基自由基、DPPH自由基的清除作用均强于SR-50组分,说明经过中压液相色谱的纯化,物质中抗氧化活性成分的纯度提高了。
　　(3)联合应用紫外光谱分析、常规显色反应及液质联用方法对纯化所得的抗氧化有效组分SR-50-I组分进行鉴定,结合文献资料,初步推断了SR-50-I组分含有儿茶酚、表儿茶素和桑色素三种多酚、黄酮类化合物。此三种化合物有望成为标识成分作为孔石莼中抗氧化活性物质的质量控制指标。

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第1章 绪 论

1.1课题的来源

1.2课题研究的背景和意义

1.3孔石莼的研究概况

1.4天然产物的提取、分离、纯化方法

1.5体外抗氧化评价方法

1.6课题主要研究内容

第2章 实验材料与方法

2.1实验材料与试剂

2.2实验仪器及设备

2.3实验材料前期处理

2.4孔石莼粗提物提取的单因素试验

2.5孔石莼粗提物提取的正交试验

2.6孔石莼粗提物最佳提取工艺验证试验

2.7孔石莼体外抗氧化有效活性物质的分离纯化

2.8体外抗氧化有效组分的筛选

2.9孔石莼体外抗氧化有效组分的分析

2.10数据处理与统计分析

第3章 孔石莼粗提物提取条件的优化

3.1引言

3.2孔石莼粗提物提取的单因素试验

3.3孔石莼粗提物提取的正交试验

3.4孔石莼粗提物最佳提取工艺验证试验

3.5本章小结

第4章 孔石莼体外抗氧化有效活性物质的分离纯化

4.1引言

4.2孔石莼体外抗氧化有效萃取层的筛选

4.3大孔树脂分离纯化体外抗氧化有效萃取组分

4.4中压液相色谱分离纯化体外抗氧化有效洗脱组分

4.5本章小结

第5章 孔石莼体外抗氧化有效组分的分析

5.1引言

5.2紫外光谱检测

5.3显色反应

5.4 HPLC-MS检测

5.5本章小结

结论

参考文献

攻读硕士学位期间发表的学术论文

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