鸡γ干扰素基因的克隆和表达及其多克隆抗体的制备

摘要

γ-干扰素(Interferon-γ,IFN-γ)主要由活化的T细胞及NK细胞产生,具有抗病毒作用,也具有上调MHCⅡ(major histocompatibility complex,MHC)类抗原分子的表达等作用,是影响机体细胞免疫和体液免疫反应的一类具有多种调节效应的细胞因子.该试验根据国外已发表的序列,设计一对引物,应用逆转录-聚合酶链式反应(Reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)技术,从刀豆素A(Concanavalin A,Con A)诱导培养24h的鸡脾淋巴细胞中扩增得到了大小约500bp的基因,将其连接到pUC19质粒上,经质粒PCR和EcoR I、HinDⅢ双酶切鉴定后,筛选阳性重组克隆.序列分析表明,该基因阅读开放框架由492个核苷酸组成,与马和人IFN-γ基因序列的同源性分别为35﹪和32﹪,与鸡Ⅰ型干扰素基因的同源性仅为15﹪,与国外报道的鸡IFN-γ基因序列完全一致.这表明鸡脾淋巴细胞受到有丝分裂原刺激后,其IFN-γ基因mRNA获得了表达.该试验成功克隆得到了鸡IFN-γ基因.

目录

文摘

英文文摘

1引言

1.1细胞因子的研究概况

1.2干扰素的生物学作用

1.2.1干扰素-γ的抗病毒作用

1.2.2干扰素-γ的抗细胞增殖作用

1.2.3干扰素-γ的免疫调节作用

1.3鸡干扰素的研究概况

1.3.1Ⅰ型鸡干扰素

1.3.2 Ⅱ型鸡干扰素

1.3.3鸡干扰素激活蛋白

1.4干扰素用于治疗与预防疾病的潜力

2材料与方法

2.1材料

2.1.1实验动物

2.1.2质粒和受体菌

2.1.4引物

2.1.5主要仪器

2.2方法

2.2.1鸡脾细胞的培养及总RNA的提取

2.2.4克隆鉴定及序列测定

2.2.7融合蛋白的免疫原性研究

3.结果

3.2重组阳性质粒pUC19-chIFN-γ的鉴定

3.3重组质粒pPROEXTMHT-IFN-γ的鉴定

3.6免疫原性研究

4讨论

5结论

参考文献

致谢

附录