乳源抗高血压生物活性肽在大肠杆菌中表达的研究

摘要

研究表明,肾素-血管紧张素系统(RAS)在机体的血压调节过程中起着十分重要的作用.在该系统中,ACE酶是血压调节过程中一个关键的酶,它可以将无活性的血管紧张素Ⅰ(Ang Ⅰ)水解生成具有血管收缩作用的血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ),从而导致血管收缩,机体的血压升高.ACEI可抑制ACE酶的活性,从而抑制了Ang Ⅰ向Ang Ⅱ的转化,使机体血压维持恒定.因此,ACEI在治疗高血压病中的应用也越来越广泛.但是使用药物治疗都有一定的副作用,所以,寻找安全的、天然的、食物来源的ACEI物质来治疗高血压引起了广大科学家们极大的关注.有研究报道,在牛乳酪蛋白的胰蛋白酶水解物中分离到了一些在体外具有ACE酶抑制活性、经动物实验(体内实验)证明具有降低血压作用的抗高血压生物活性肽.这一研究结果引起了科学家们的极大兴趣,极大地促进了乳源抗高血压小肽的研究.然而,到目前为止,所有的乳源抗高血压小肽都是通过蛋白酶对乳蛋白质的水解获得的,还没有通过基因工程技术来表达抗高血压小肽的研究报道.研究目的:该课题的研究目的是研究乳源抗高血压生物活性肽CEI<,12>在大肠杆菌中的表达情况,探讨采用基因工程技术大量生产乳源抗高血压生物活性肽CEI<,12>的可能性.

目录

文摘

英文文摘

引言及文献综述

1课题研究背景、立题依据及研究意义

2乳源生物活性肽的研究进展

2.1类吗啡活性肽(Opioid Peptides)

2.2酪蛋白磷酸肽(Caseinophosphopeptides,CPPs)

2.3免疫刺激肽(Immunostimulating Peptides)

2.4抗高血压活性肽(Antihypertensive peptides,APPs)

3高血压研究概况

3.1高血压的危害及其治疗

3.2肾素-血管紧张素系统及高血压

3.3激肽-激肽释放酶系统

3.4血管紧张素转换酶抑制剂

1材料与方法

1.1目的基因与载体的连接与转化

1.2目的基因CEI12在大肠杆菌中表达的研究

1.3重组菌的生长曲线的研究

1.4不同的重组菌株生长曲线的研究

1.5不同温度培养对重组菌株生长和目的蛋白表达的影响

1.6不同的发酵方式对重组菌生物量的影响

1.7 ACE酶抑制活性的测定

2结果与分析

2.1目的基因与载体的连接与转化

2.1.1 pQE16质粒和目的基因的酶切

2.1.2阳性克隆的筛选

2.1.3不同大肠杆菌菌株的转化

2.2目的基因表达的研究

2.2.1表达产物的纯化

2.2.2 pQE16+JM109的诱导表达研究

2.2.3 重组菌pQE16+BL21的诱导表达

2.2.4 pQE16+DH5 α诱导表达的研究

2.3重组菌的生长曲线的研究

2.3.2重组菌生长曲线的研究

2.3.3不同的碳源对重组菌pQE16+JM109的生长曲线的影响

2.3.4不同氮源对重组菌pQE16+JM109的生长曲线的影响

2.3.5不同pH值对重组菌pQE16+JM109的生长曲线的影响

2.3.7不同胰蛋白胨浓度对重组菌pQE16+JM109生长曲线的影响

2.4不同的重组菌株生长曲线的对比研究

2.5不同温度培养对重组菌株生长和目的蛋白表达的影响

2.5.1不同温度培养对重组菌株生长的影响

2.5.2不同温度诱导对重组菌株目的蛋白表达的影响

2.6不同的发酵方式对重组菌生物量的影响

2.7纯化表达产物的ACE抑制活性的研究

3讨论

3.1目的基因与表达载体的连接与转化

3.2重组菌的筛选鉴定

3.3目的基因在不同菌株中的表达

3.4提高目的基因的表达水平

3.5目的基因CEI12的诱导表达

3.6表达载体的选择

3.7关于SDS-PAGE电泳

3.8关于重组菌发酵方式的研究

3.9关于ACE酶抑制活性的测定

4结论

参考文献

附录

个人简历

致谢

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