中药王不留行主要成分对小鼠乳腺上皮细胞功能的影响

摘要

本文探讨了中药王不留行主要成分对小鼠乳腺上皮细胞功能的影响。本研究采用溶剂萃取法与酸碱法对王不留行三类主要成分进行提取，并用化学方法及薄层层析方法予以鉴定。将三种成分分别以不同浓度添加入细胞培养液，一方面，采用MTT法检测这三类成分对体外培养的小白鼠乳腺上皮细胞增殖的作用，并运用激光共聚焦显微技术对乳腺上皮细胞中细胞周期蛋白cyclin Dl的表达进行鉴定；另一方面，运用荧光定量RT-PCR方法对细胞中β-酪蛋白的表达进行检测，并用激光共聚焦显微技术对细胞信号通路中磷酸化stat5因子的表达进行鉴定，最后通过动物实验加以辅证。结果表明，王不留行中的黄酮甙类成分对小鼠乳腺上皮细胞的增殖有明显的促进作用(P<0.05)，并随其浓度(100～200mg/L)的增加，其促进作用增强；皂甙类成分则对小鼠乳腺上皮细胞的增殖有明显的抑制作用，并随浓度(50～200mg/L)的增加而抑制作用增强：香豆素类成分(20～200mg/L)则对小鼠乳腺上皮细胞的增殖无明显作用(P>0.05)。

目录

文摘

英文文摘

声明

1前言

1.1中药王不留行及其研究现状

1.1.1中药王不留行简介

1.1.2王不留行的生物学功能

1.1.3王不留行的主要成分

1.1.4王不留行等中药在奶牛饲养业中的作用

1.2奶牛乳腺发育与泌乳

1.2.1奶牛乳腺发育的基本规律

1.2.2奶牛乳腺泌乳的基本机制

1.2.3奶牛乳腺的发育和泌乳的调控

1.2.4研究奶牛乳腺发育与泌乳的技术方法

1.3研究的目的与意义

2材料与方法

2.1实验材料

2.1.1实验仪器与材料

2.1.2实验动物

2.1.3实验试剂

2.2实验方法

2.2.1中药王不留行三种成分的提取与鉴定

2.2.2三种成分对小鼠乳腺上皮细胞增殖的影响

2.2.3三种成分对小鼠乳腺上皮细胞β-酪蛋白表达的影响

2.2.4动物实验

3结果与分析

3.1中药王不留行三种成分的提取与鉴定

3.1.1皂甙类成分的提取与鉴定

3.1.2黄酮甙类成分的提取与鉴定

3.1.3香豆素类成分的提取与鉴定

3.2三种成分对小鼠乳腺上皮细胞增殖的影响

3.2.1小鼠乳腺上皮细胞的培养及鉴定

3.2.2 MTT法检测细胞增殖活力

3.2.3黄酮甙类成分对cyclin D1表达的影响

3.3三种成分对小鼠乳腺上皮细胞β-酪蛋白表达的影响

3.3.1细胞总RNA的甲醛变性凝胶电泳

3.3.2荧光定量PCR检测β-酪蛋白的表达

3.3.3黄酮甙类成分对磷酸化stat5因子表达的影响

3.4动物实验

4讨论

4.1王不留行三种成分的提取与鉴定

4.1.1皂甙类成分的提取与鉴定

4.1.2黄酮甙类成分的提取与鉴定

4.1.3香豆素类成分的提取与鉴定

4.2乳腺上皮细胞的原代培养

4.3乳腺上皮细胞增殖的MTT法检测

4.4荧光定量PCR检测方法

4.4.1 SYBR Green Ⅰ检测方法引物的设计

4.4.2 SYBR Green Ⅰ检测方法的优化

4.5王不留行三种成分对小鼠乳腺上皮细胞功能的影响

4.5.1三种成分对小鼠乳腺上皮细胞增殖的影响

4.5.2三种成分对小鼠乳腺上皮细胞泌乳的影响

4.5.3王不留行提高奶牛产奶量应用展望

5结论

致谢

参考文献

攻读学位期间发表的学术论文