鸡传染性贫血病毒LAMP诊断方法的建立与检测

摘要

鸡传染性贫血病(chicken infectious anemia，CIA)是由鸡传染性贫血病毒(chicken anemiavirus，CAV)引起的一种危害雏鸡的免疫抑制性疾病。1日龄雏鸡最易感，雏鸡感染的死亡率为10-20％。此外，该病的感染能致使鸡群免疫抑制，降低疫苗的使用效率，继发其它疾病，鸡只生产性能下降，造成更为严重的间接损失。
　　 由于该病在鸡群中具有一定的隐蔽性，使得该病在大部分鸡群长时间地普遍存在。血清调查显示几乎所有鸡群均不同程度地存在该病的感染，增大了对该病的防制难度。因而从病原学的角度对该病进行检测是很有必要的。环介导等温扩增反应技术自被发明以来，由于其反应条件简易，反应结果可视，受到广泛的关注，并越来越多地应用于各行业的检测。
　　 本试验尝试建立鸡传染性贫血病毒的LAMP检测方法，并期望开发出可应用于临床的检测试剂。通过对鸡传染性贫血病毒基因组的比对，并结合病毒基因组的特点，选取保守的VP2基因作为鸡传染性贫血病毒LAMP引物的设计区域。利用在线软件进行LAMP引物的设计，从大量引物中进行筛选，利用实时浊度仪对筛选引物进行验证淘汰，挑选出较好的几套引物。进一步评估其特异性与灵敏度。直至选出最佳引物组。
　　 实验结果表明该引物不与其它常见的病毒性禽传染病发生非特异反应；反应1h与普通PCR反应30个循环相当或更为灵敏。初次对22份临床样本的检测符合率为100%。以最佳引物组配制质量可控的两批制品。
　　 第一批制品对人工感染的动物试验样品检测符合率为85.1%；第一批制品对临床样本的检测符合率为83.6%。第一批制品对24株鸡传染性贫血病毒的敏感性检测率为100%，并且具有良好的批内批间重复性。第一批制品保存超过一年后的检测灵敏度仍可达到103拷贝的质粒标准品。
　　 第二批制品对人工感染的动物试验样品检测符合率为93.5%；第二批制品对临床样本的检测符合率为83.7%。进一步的试验仍在继续进行中。本试验成功建立了鸡传染性贫血病毒的LAMP检测方法，该方法特异、灵敏、重复性好，为试剂盒的开发奠定了基础。