过量锰对鸡睾丸NF-κB/iNOS-COX-2信号通路及HSPs的毒性影响

摘要

锰是动物和人体内必需微量元素之一。然而，过量的锰会对人和动物造成伤害，但过量锰对禽类生殖系统的炎症和热休克蛋白的影响尚不清晰。本研究的目的是探讨过量锰对鸡睾丸中NF-κB/iNOS-COX-2信号通路及热休克蛋白的影响。将7日龄180只海兰公鸡分为商品日粮和分别含锰为600mg/kg、900mg/kg和1800mg/kg的商品日粮，饲喂30天、60天和90天。检测转录因子的核因子-κB（NF-κB）、肿瘤坏死因子(TNF-a)、环氧酶-2(COX-2)、一氧化氮合成酶(iNOS)和热休克蛋白(HSP)27、HSP40、HSP60、HSP70和HSP90的mRNA水平、NO含量、iNOS活力、组织学及超微结构的变化。结果显示:
　　(1)过量的锰使得NF-κB、TNF-a、COX-2、iNOS的mRNA水平升高。并且过量的锰对NF-κB和TNF-a具有时间效应的影响。过量的锰在60天和90天时正调节了NO含量和iNOS活力。过量的锰对NO含量与iNOS的活力具有剂量和时间效应影响。过量的锰可以通过影响NF-κB/iNOS-COX-2信号通路而导致了鸡睾丸的炎症损伤。
　　(2)过量的锰抑制了HSP40和HSP60的mRNA表达，诱导了HSP27、HSP70和HSP90的mRNA表达。而且同时具有时间和剂量效应。
　　(3)过量的锰引起了鸡睾丸组织学和超微结构的改变，并且随着时间和剂量的增加伤害程度增加。

目录

声明

摘要

1 前言

1．1 锰

1．1．1 锰的基本性质与用途

1．1．2 锰的生物学与生理功能

1．1．3 锰与神经系统

1．1．4 锰与免疫系统

1．1．5 锰与生殖系统

1．2 NF-κB，iNOS，COX-2和TNF-a

1．2．1 NF-κB

1．2．2 TNF-a

1．2．3 COX-2

1．2．4 iNOS

1．3 热休克蛋白

1．4 试验研究的目的与意义

2 材料与方法

2．1 试验动物

2．2 试验主要仪器与试剂

2．2．1 主要仪器

2．2．2 主要试剂

2．3 组织取样和准备

2．4 mRNA的表达的测定

2．4．1 总RNA的提取

2．4．2 cDNA的合成

2．4．3 引物序列

2．4．4 实时定量PCR

2．5 NO和NOS的检测

2．6 睾丸的组织学检查

2．7 睾丸的超微结构检查

2．8 数据分析与统计

3 结果与分析

3．1 qPCR法检测目的基因mRNA水平方法的建立

3．1．1 总RNA的抽提与鉴定

3．1．2 目的基因实时qPCR方法的鉴定

3．2 锰对鸡睾丸NF-κB，COX-2，TNF-a，和iNOS的mRNA水平的影响

3．3 锰对鸡睾丸热休克蛋白的mRNA水平的影响

3．4 锰对鸡睾丸NO含量和iNOS活力的影响

3．5 鸡睾丸组织学变化

3．6 鸡睾丸超微结构变化

3．6．1 精原细胞

3．6．2 精母细胞

3．6．3 支持细胞

4 讨论

5 结论

致谢

参考文献

攻读硕士学位期间发表的学术论文