榛蘑多糖的提取、纯化及体外降血脂研究

摘要

在本次研究中，采用榛蘑作为试验原料，对榛蘑多糖的超声波辅助酶法提取、分离纯化所需的试剂以及条件进行摸索。在研究体外降血脂的试验中，将榛蘑干粉、纯化后的榛蘑多糖Z1、Z2以及香菇多糖分别与不同胆酸盐的结合能力作比较，为日后榛蘑多糖的开发奠定了理论基础。
　　本研究主要内容包括：⑴研究了榛蘑中多糖的提取条件，以榛蘑多糖提取率为指标，采用超声波辅助复合酶（纤维素酶、木瓜蛋白酶）法进行试验。通过单因素试验研究了酶解温度、超声功率、超声时间、液料比、酶解时间、复合酶比例以及加酶量对榛蘑多糖提取率的影响，之后进行响应面优化试验。通过单因素试验，得出了酶解温度50℃、超声功率360 W、超声时间20 min;通过响应面优化试验，得到的最佳提取条件为:加酶量1.9％、复合酶比例2∶1、酶解时间138 min、液料比30∶1(mL/g)。在以上环境下，得出榛蘑多糖的提取率为40.56％。⑵将Sevage试剂加入到需要除蛋白的粗多糖溶液中，将不同除蛋白条件下蛋白质脱除率和多糖保留率当作指标，通过计算得出最佳的工艺条件:氯仿∶正丁醇体积比为5∶1;样液∶Sevage体积比为5∶1;脱蛋白次数为3次、振摇时间为30min。⑶将过氧化氢溶液加入到需要脱色的粗多糖溶液中，将不同脱色条件下的脱色率和多糖保留率当作指标。通过计算得出最佳的工艺条件:脱色温度为50℃;溶液pH值为8.0;脱色时间为3h;过氧化氢添加量为40％。⑷经过脱蛋白及脱色后的榛蘑多糖溶液通过乙醇分级沉淀进行分离，之后采用凝胶层析柱法进一步分离纯化，冷冻干燥后得到Z1、Z2纯多糖。纯化后的榛蘑多糖使用紫外分析光谱进行扫描，表明其不含蛋白质、氨基酸以及核酸;结构的分析采用红外分析光谱法，表明榛蘑多糖Z1、Z2均为β-吡喃多糖;榛蘑多糖Z1、Z2的单糖组成分析采用高效液相色谱法。多糖Z1由半乳糖、甘露糖、鼠李糖、葡萄糖、阿拉伯糖、岩藻糖组成;多糖Z2由半乳糖、甘露糖、鼠李糖、葡萄糖、岩藻糖组成。⑸通过体外降血脂试验，对照物的主要成分为辛伐他汀的降血脂药物以及香菇多糖，研究榛蘑干粉、纯化后的榛蘑多糖Z1、Z2对胆酸盐的结合能力的影响。当反应剂量相同时，香菇多糖对不同胆酸盐的结合能力普遍低于榛蘑多糖Z1、Z2对胆酸盐的结合能力。综上所述，证实榛蘑多糖具有降血脂的能力。

目录

声明

摘要

1 前言

1．1 榛蘑的概述

1．1．1 榛蘑的营养价值

1．1．2 榛蘑的研究现状

1．2 多糖概述

1．2．1 多糖的研究现状及应用前景

1．2．2 榛蘑多糖的研究现状

1．2．3 榛蘑多糖的生物活性功能

1．3 多糖的提取与分离纯化

1．3．1 多糖的提取

1．3．2 多糖的分离纯化

1．3．3 多糖的降血脂作用

1．4 课题研究的研究意义及内容

1．4．1 课题的研究意义

1．4．2 课题的研究内容

2 材料与方法

2．1 材料与设备

2．1．1 试验材料

2．1．2 试剂

2．1．3 仪器

2．2 试验方法

2．2．1 榛蘑多糖的测定方法

2．2．2 榛蘑多糖的超声波辅助复合酶法提取工艺

2．2．3 榛蘑多糖的纯化

2．2．4 榛蘑多糖的结构分析

2．2．5 体外降血脂研究

2．2．6 统计分析

3 结果与分析

3．1 榛蘑多糖的超声波辅助酶法提取

3．1．1 葡萄糖标准曲线

3．1．2 液料比对榛蘑多糖提取率的影响

3．1．3 酶解时间对榛蘑多糖提取率的影响

3．1．4 酶解温度对榛蘑多糖提取率的影晌

3．1．5 加酶量对榛蘑多糖提取率的影响

3．1．6 复合酶比例对榛蘑多糖提取率的影响

3．1．7 超声功率对榛蘑多糖提取率的影响

3．1．8 超声时间对榛蘑多糖提取率的影响

3．1．9 响应面优化试验结果

3．2 榛蘑多糖的纯化

3．2．1 Sevage法除蛋白

3．2．2 过氧化氢脱色

3．2．3 乙醇分级沉淀得到的不同榛蘑多糖组分

3．2．4 凝胶柱层析法纯化榛蘑多糖

3．3 榛蘑多糖的结构和活性研究

3．3．1 榛蘑多糖的紫外光谱分析结果

3．3．2 榛蘑多糖的红外光谱分析结果

3．3．3 榛蘑多糖的单糖组成分析

3．4 榛蘑多糖的体外降血脂

3．4．1 胆酸盐的标准曲线

3．4．2 胆酸盐检测方法的稳定性

3．4．3 榛蘑干粉、纯化后的榛蘑多糖及香菇多糖对不同胆酸盐结合效果的比较

4．讨论

5．结论

致谢

参考文献

攻读硕士学位期间发表的学术论文