根癌农杆菌介导的纳豆激酶基因在番茄中的转化与表达

摘要

纳豆激酶(nattokinase,简称NK)是一种丝氨酸蛋白激酶，最初是从日本传统发酵食品纳豆(natto)中提取得到的。纳豆激酶具有和链激酶、尿激酶等溶血栓药物相同的溶栓的作用，但纳豆激酶可直接口服，易被人体吸收，具有安全性好、作用持续时间长等优点，是一种有发展潜力的新型溶血栓剂。 本实验将来源于枯草芽孢杆菌的纳豆激酶基因转化到人类可以直接食用的，又非常喜爱的蔬菜—番茄中，期望得到活性表达。人们在食用转基因番茄的同时，便可以获得纳豆激酶，有着良好的应用前景。 本实验对来源于纳豆芽孢杆菌的纳豆激酶基因在番茄表达系统中的表达进行了以下几个方面的研究工作：1.将编码纳豆激酶基因成熟肽的nk序列，编码前肽、成熟肽的pro-nk序列分别克隆到供体质粒上，构建了两个重组质粒，分别命名为pCIAMBIA2300-nk1和pCIAMBIA2300-nk2。同时使nk基因的上游和下游分别具有植物中特异的启动子和终止子。 2.活化根癌农杆菌EHA105,将pCIAMBIA2300-nk1和pCIAMBIA2300-nk2分别转化入EHA105，分别命名为EHA105-nk1和EHA105-nk2。 3.通过农杆菌介导，转化番茄的下胚轴，诱导愈伤组织形成及分化成幼苗，进而再生出完整植株。提取再生植株基因组DNA，通过PCR扩增检测，结果表明纳豆激酶基因已经成功整合到番茄植物基因组中。RT-PCR实验结果证明了纳豆激酶基因在转录水平上有表达。 4.提取经检测为阳性的转基因植株的叶片提取植物总蛋白质，SDS-PAGE检测，结果表明转化了编码成熟肽的纳豆激酶基因的植株有大小与纳豆激酶蛋白大小一致的特征性的蛋白表达。

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文摘

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第一部分文献综述

第二部分材料与方法

第三部分结果与讨论

小结

参考文献

致 谢

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