粗毛纤孔菌三萜类化合物提取、分离纯化及降血脂功能研究

摘要

粗毛纤孔菌（Inonotus hispidu）属担子菌门(Basidiomycota)是一种十分珍贵的药用真菌，含有丰富的三萜类化合物、黄酮、多糖、甾醇等多种生物活性成分，在民间常用于治疗胃病、风湿、糖尿病及癌症等疾病。研究表明三萜类化合物是一种环状结构物质，具有降血脂、抗氧化、抗炎、抗肿瘤等作用。因此本论文以本粗毛纤孔菌子实体为原料，研究了粗毛纤孔菌三萜类化合物的提取方法、纯化工艺及其降血脂功能，为粗毛纤孔菌及三萜类化合物的开发利用奠定理论基础。研究的主要结论如下:
　　(1)本试验以三萜类化合物得率和对胆酸盐结合能力为考察指标，研究了不同提取技术对粗毛纤孔菌三萜类化合物制备及体外降血脂作用的影响，结果发现高剪切辅助技术制备粗毛纤孔菌三萜类化合物得率最高，值为3.33±0.02％，其次是双水相技术，超声波辅助技术，半仿生技术，最小是溶剂回流技术（1.26±0.05％）。胆酸盐结合实验表明，提取技术显著影响粗毛纤孔菌三萜类化合物对胆酸盐结合能力，其中高剪切技术制备的三萜类化合物对胆酸盐的结合能力显著高于其他四种提取技术(P＜0.05)，且其结合能力与三萜类化合物浓度呈剂量效应关系，浓度在40mg/mL时，对甘氨胆酸钠的结合能力为1.01±0.03μmol/100mg，对胆酸钠的结合能力为0.47±0.04μmol/100mg，对牛磺胆酸钠的结合能力为1.31±0.09μmol/100mg，分别是辛伐他汀结合三种胆酸盐能力的36.53％、27.92％、46.33％。红外光谱分析显示，高剪切技术提取的粗毛纤孔菌三萜类化合物初步符合三萜类物质的特征结构，且特征吸收峰最强。
　　(2)试验研究了AB-8、D-101、D-4020、NKA-9、X-5和D3520六种大孔树脂对粗毛纤孔菌三萜化合物的一级纯化，经过静态试验分析吸附率和解吸率，发现D-101型树脂对粗毛纤孔菌三萜类化合物纯化效果最好，其回收率可达39.44±0.76％。D-101树脂动态吸附试验研究确定最佳工艺条件为，上样液浓度为0.20mg/mL，pH值为6，上样液流速0.25mL/min，采用80％的乙醇溶液进行洗脱，洗脱流速为1mL/min，在此条件下，三萜化合物纯度从6.6±0.15％提高到35.4±0.06％，提高了5.36倍，回收率达76.26％。
　　(3)以血清四项为评价指标，建立高脂血症小鼠模型，对三萜类化合物体内降血脂作用进行了研究。结果表明:三萜类化合物能够显著(P＜0.05)降低小鼠血清中胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白胆固醇水平，升高高密度脂蛋白胆固醇水平。
　　综上所述，本研究证实了粗毛纤孔菌三萜类化合物的降血脂功效，为三萜类化合物用于预防治疗高脂血症提供了理论依据。

目录

摘要

1 绪论

1．1 研究的目的与意义

1．2 粗毛纤孔菌的简介

1．2．2 粗毛纤孔菌的药用价值

1．2．3 粗毛纤孔菌的活性成分分析

1．3 三萜类化合物的研究现状

1．3．1 三萜类化合物的提取方法

1．3．2 三萜类化合物的分离纯化

1．3．3 三萜类化合物的生理活性

1．4 研究内容

2 提取技术对粗毛纤孔菌三萜类化合物体外降血脂研究

2．1 前言

2．2 实验仪器与材料

2．2．3实验仪器

2．3 实验方法

2．3．1 粗毛纤孔菌三萜类化合物的制备

2．3．2 粗毛纤孔菌提取物活性成分含量的测定

2．3．3 粗毛纤孔菌三萜类化合物含量的测定

2．3．4 三萜类化合物体外降血脂作用的测定

2．3．5 不同提取技术粗毛纤孔菌三萜类化合物的红外光谱分析

2．4 统计分析

2．5 结果与分析

2．5．1 粗毛纤孔菌提取物中活性成分分析

2．5．2 不同提取技术粗毛纤孔菌三萜类化合物红外光谱(IR)分析

2．5．3 活性成分对胆酸盐降血脂作用的相关性分析

2．5．4 不同提取技术对三萜类化合物得率的影响

2．5．5 提取技术对三萜类化合物与苷氨胆酸钠结合能力的影响

2．5．6 提取技术对三萜类化合物与牛磺胆酸钠结合能力的影响

2．5．7 提取技术对三萜类化合物与胆酸钠结合能力的影响

2．5．8 不同提取技术三萜类化合物对降血脂作用的影响

2．6 本章小结

3 粗毛纤孔菌三萜类化合物分离纯化的研究

3．1 前言

3．2．1 实验原料

3．2．2 实验试剂

3．2．3 实验仪器

3．3 实验方法

3．3．1 大孔吸附树脂的纯化工艺流程

3．3．2 大孔吸附树脂静态吸附与解析试验

3．3．3 大孔吸附树脂动态吸附与解析试验

3．4 统计分析

3．5 结果与分析

3．5．1 大孔吸附讨脂静态吸附与解析结果

3．5．2 大孔吸附树脂动态吸附与解析结果

3．5．3 粗毛纤孔菌三萜类化合物纯度及回收率

3．6 本章小结

4 粗毛纤孔菌三萜类化合物降血脂功能的研究

4．1 前言

4．2．1 实验原料

4．2．2 实验试剂

4．2．3 实验仪器

4．3 实验方法

4．3．1 动物分组及高脂模型的建立

4．3．2 给药方式

4．3．3 样本的采集

4．3．4 脏器指数的测定

4．3．5 血清TC、TG、LDL-C、HDL-C指标及动脉粥样硬化指数(AI)

4．3．6 肝脏组织中TC、TG的测定

4．4 统计分析

4．5 结果与分析

4．5．1 高脂饲料建模对TC和TG的影响

4．5．2 粗毛纤孔菌三萜类化合物对小鼠体重的影响

4．5．3 粗毛纤孔菌三萜类化合物对脏器指数的影响

4．5．4 三萜类化合物对小鼠血清TG、TC、HDL-C、LDL-C的影响

4．5．5 三萜类化合物对动脉粥样硬化指数的影响

4．5．6 粗毛纤孔菌三萜类化合物对肝脏中TC、TG的影响

4．6 本章小结

结论

参考文献

附录

攻读学位期间发表的学术论文

致谢

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