RET基因真核表达载体的构建及其体外定点突变

摘要

本研究着眼于反向论证，即构建RET真核表达载体，完成体外定点突变，获得激活的癌基因，并理论分析癌基因产物改变。 实验方法： (1)采用重组DNA技术构建RET真核表达载体pcDNA3.0-RET。利用Hand Ⅲ及Not Ⅰ限制性核酸内切酶，分别消化PSK-RET及pcDNA3.0空质粒，获得目的基因及相应载体后，通过T4连接酶重组DNA。通过Amp抗性、酶切鉴定及DNA序列分析，确定阳性克隆。 (2)利用PCR诱导突变的方法完成RET体外定点突变。设计与合成包含突变位点的引物，PCR扩增目的质粒。Dpn Ⅰ酶消化原始模板，转化感受态细菌，采用Amp抗性、PCR扩增及DNA序列分析，确定突变菌株。 (3)利用OMIGA2.0蛋白分析软件，依据突变前后RETcDNA序列对Ret蛋白进行二级结构及蛋白性质进行预测分析。 实验结论： (1)成功构建了RET真核表达载体pcDNA3.0-RET。 (2)成功完成了RET基因定点突变。

目录

文摘

英文文摘

郑重声明

前言

材料与方法

一、主要试剂与材料

二、主要实验方法

结果

一、RET真核表达载体的构建

二、RET体外定点突变

三、Ret蛋白结构及性质分析

讨论

二、PCR介导的体外突变

结论

参考文献

综述:RET基因与其相关疾病研究进展

参考文献

英文缩写字表

致谢