西瑞香素药代动力学及对人乳腺癌细胞的增殖抑制作用研究

摘要

西瑞香素（7-羟基-6-甲氧基-3,7,-dicoumarylether），是瑞香烷类的原酸酯二萜化合物，是从瑞香科植物中提取出来的有效成分。西瑞香素的药效学和毒理学研究表明该化合物具有较低的毒性，具有较好的抗病毒、抗肿瘤活性，对人骨肉瘤、宫颈癌、鼻咽癌、肺癌具有抗肿瘤作用，对乙肝病毒的表达也具有抑制作用。西瑞香素有望成为新型的抗病毒抗肿瘤药物，具有较好的开发前景。西瑞香素的非临床代谢动力学以及细胞生物学研究有利于揭示该药物在动物体内的动态变化规律以及在体外的抗肿瘤活性，为西瑞香素的质量评价和进一步的研究提供依据。
　　目的：对大鼠进行西瑞香素静脉注射的药代动力学研究，以揭示该药物在大鼠体内的动态变化规律；同时对西瑞香素的抗肿瘤作用进行了研究，为进一步开发利用此药提供了依据。
　　方法：药动学研究：采用HPLC法测定血浆中西瑞香素的药物浓度，首先建立了西瑞香素的方法学，并进行方法学确证，考察专属性、精密度、准确度、回收率、稳定性；给药前24h大鼠禁食，股静脉注射西瑞香素，给药后5min、10min、15min、20min、30min、1h、1.5h、2.5h、3h、6h、9h、10h定时眼底静脉丛取血，肝素抗凝后，血浆采用甲醇和乙酸乙酯沉淀蛋白质，12000 r/min离心5min，吸取上清液血浆置-20℃冷冻保存，离心后的上清液在30℃氮气流吹干，残渣用流动相溶解、超声、涡旋后再离心，取上清液进样分析，用BAPP软件处理，得到相应的药代动力学参数；药效学研究：用不同浓度的西瑞香素（35μg/ml、50μg/ml、65μg/ml、80μg/ml）和空白溶剂对照组（全培养基组）干预对数期人乳腺癌MCF-7细胞24h、48h、72h后，CCK-8法测定西瑞香素对人乳腺癌细胞的增殖抑制作用，用倒置显微镜观察结果。
　　结果：在0.05~20.0μg/mL线性关系良好，R2大于0.99，最低定量限为0.05μg/mL；低、中、高浓度（0.1μg/mL、5.0μg/mL、15.0μg/mL）质控样品的提取回收率分别是83.84％、85.08%、86.40%，低、中、高浓度质控内标物的提取回收率分别是90.9%、90.4%、91.1%；低、中、高浓度的西瑞香素的日内精密度分别是10.64%-16.28%、4.30%-6.40%、1.39%-3.44%，日间精密度分别是12.80%、5.04%、2.15%，RSD%均小于15%；准确度分别为95.88%、95.84%、95.04%，RSD%均在±15%之内；实验条件下药物的稳定性良好；大鼠股静脉注射西瑞香素的平均分布相半衰期为0.06±0.02h，平均消除相半衰期为4.01±2.93h，AUC为0.56±0.26ug·h·ml-1；浓度为35ug/mL的西瑞香素在24h、48h、72h对人乳腺癌MCF-7细胞抑制率为11.32%、12.55%、20.20%，浓度为50ug/mL的西瑞香素在24h、48h、72h对人乳腺癌MCF-7细胞的抑制率为14.07%、17.66%、30.48%，浓度为65ug/mL的西瑞香素在24h、48h、72h对人乳腺癌MCF-7细胞的抑制率为15.87%、28.37%、47.59%，浓度为80μg/ml的西瑞香素在24h、48h、72h对人乳腺癌MCF-7细胞的抑制率为18.62%、39.57%、62.58%。
　　讨论：本实验建立的西瑞香素HPLC检测方法高效、专属性高、灵敏度高，可对后续在犬或人血浆药动学研究的方法学探索提供方法学的依据；西瑞香素在大鼠体内半衰期较短，不利于药效的维持，可考虑在保留西瑞香素原来基础上进行结构的修饰，以期延长药物半衰期、增加作用时间而达到提高疗效的目的；西瑞香素对人乳腺癌MCF-7细胞的增殖具有一定的抑制作用，且其抑制作用具有时间和剂量依赖性。

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前言

第一部分 西瑞香素的药代动力学研究

1 仪器与色谱条件

1.1 仪器

1.2 药品和试剂

1.3 实验动物

1.4 色谱条件

1.5 溶液的配制

1.6 血浆样品的处理

2 大鼠血浆方法学的建立

2.1 专属性考察

2.2 标准曲线的绘制

2.3 血浆中西瑞香素回收率的测定

2.4 精密度试验

2.5 准确度测定

2.6 稳定性的考察

2.7 小结

3 西瑞香素在大鼠体内的药代动力学研究

3.1 实验材料

3.2 试验方法

3.3 数据处理

3.4 实验结果

3.5 小结

第二部分 西瑞香素细胞增殖抑制作用研究

1 实验材料

1.1 药物和细胞系

1.2 主要仪器

1.3 材料与试剂

1.4 主要试剂的配置

2 实验方法与操作

2.1 细胞培养

2.2 细胞计数

2.3 CCK-8法

3 实验结果

3.1 MCF-7细胞的生长曲线

3.2 西瑞香素对MCF-7细胞的增殖的抑制作用

3.3 小结

第三部分 结论与讨论

附图

参考文献

个人简历、在学期间发表的学术论文

致谢